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NO在实验性慢性盆腔炎中参与非特异性免疫损伤的研究 作者：张三元,林仲秋,苏园园 单位：中山大学附属第二医院，广东 广州；中山大学附属中山医院，广东 广州 【摘要】 本实验成功地建立了慢性盆腔炎动物模型，动态观察了其慢性炎症的病变过程，发现慢性盆腔炎阶段的病变组织内已无细菌存在，但在菌体抗原持续存在的情况下，病变组织损伤进行性加重。除淋巴细胞外，可见大量活化的巨噬细胞浸润，且测巨噬细胞分泌的NO明显增高，提示巨噬细胞分泌过量的NO在慢性盆腔炎组织损伤中可能起主要作用。 【关键词】 慢性盆腔炎；巨噬细胞；NO 　　１ 资料和方法 　　1.1 实验动物 　　Wistar大鼠，体重(200plusmn;20)g，鼠龄8周～12周。 　　1.2 主要试剂及仪器 　　大肠杆菌0B4标准菌珠；IgG辣根过氧化物酶标记：北京天象人公司；日立F3000荧光分光光度仪。 　　1.3 实验方法 　　实验动物分组：实验动物分为正常组和模型组，动物分别在术后不同阶段处死，对各组进行免疫组织化学检测及NO的检测。菌液制备：溶解冻干细菌-接种在营养琼脂上（37℃18 h）再进行如下鉴定：接种在麦康凯琼脂上-证明其为革兰阴性杆菌；用肠杆菌微量快速鉴定法，-证实其为大肠杆菌；用大肠杆菌0111B4诊断血清玻片法凝集，确定该菌系大肠杆菌0111B4。细菌培养48 hmdash;将细菌增毒。用比浊法使其浓度为6times;10６/ml。模型建立：将大鼠下腹切开，用1 ml注射器抽取0.2 ml大肠杆菌悬液，在注入菌液之前用注射器机械损伤子宫内膜组织，然后注入0.1 ml菌液，在一定时期将动物处死，将子宫组织取出，取部分行病理检查。子宫组织中NO的检测，采用荧光分光度法。 　　2 结果 　　2.1 HE染色 　　感染30天后，组织结构界线不清，慢性炎细胞弥漫浸润，间质细胞减少，胶原纤维明显增多，腺体数目减少，结构破坏。60天后，以巨噬细胞浸润为主，组织结构破坏，腺体破坏、消失和扩张，并可见大量致密的胶原纤维增生。90天后，组织结构破坏更明显，各层结构因大量致密胶原纤维增生而界线消失，见表1。表1 实验组HE染色结果（略） 　　2.2 动态观察各组组织的局部巨噬细胞分泌NO的含量 见表2。表2 各组组织细胞中NO含量(略)注：Plt;0.01(与正常组相比)。 　　３ 讨论 本实验采用荧光分光度法测定了慢性盆腔炎组织NO水平变化，发现NO与巨噬细胞浸润成正相关。模型感染早期，主要以中型粒细胞浸润为主，间质内散在的淋巴细胞、巨噬细胞浸润，这时患侧局部NO含量基本处于正常水平。进入慢性阶段，即中性粒细胞浸润消失，代之以巨噬细胞、浆细胞、淋巴细胞浸润，造成组织溶解破坏的过程归为慢性阶段，即模型术后30 d，患侧局部NO含量明显增高，随着巨噬细胞的浸润为主，NO含量变化与巨噬细胞增加相平行，90 d达到高峰，提示慢性盆腔炎大鼠患侧局部NO增高，可能是巨噬细胞浸润产生的结果。 NO在局部大量产生可能是导致组织损伤的重要原因之一。巨噬细胞在致炎因子的作用下，会合成NOS，NOS合成产生的NＯ对细菌、真菌和肿瘤细胞产生杀伤作用，对其正常组织有损伤［1］。文献报道：在体内外激活的巨噬细胞可破坏胰岛正常细胞，而这种损伤作用是由NO介导的，若培养液缺少LArg或体内注射NOS抑制剂，可以保护胰岛细胞不受损伤，表明巨噬细胞和INOS产生大量的NO可损伤正常组织，参与免疫损伤。利用免疫复合物导致的肺损伤大鼠模型，证明了NO介导的非特异性免疫反应所引起的组织损害。本实验研究结果显示：CPID其模型局部NO含量较正常组明显增高。CPID中NO含量增高，导致组织损伤机制不完清楚，相关机制可能为：菌体抗原和细胞因子作为重要的炎症介质促进NO的产生。在实验性慢性盆腔炎阶段，由于菌体抗原及细胞因子的持续存在，巨噬细胞在接受上述介质的刺激后，可表达诱生型一氧化氮合成酶（INOS），该酶一旦被诱导，可持续大量合成NO，在发挥免疫效应的同时也造成局部组织损伤；NO与氧自由基反应，发生更强的细胞毒性。前提研究表明：慢性盆腔炎局部巨噬细胞活化后分泌大量的反应性氧介质O2、OH，慢性盆腔炎阶段由于大量的NO产生，NO能和超氧阴离子反应形成氧化亚硝酸阴离子ONOO，它再分解为毒性更大的OH和NO2，后者进入靶细胞或邻近细胞，引起细胞毒作用或损伤组织。 可见慢性盆腔炎局部活化的巨噬细胞分泌的过量的炎性介质NO，是造成慢性盆腔炎组织结构损伤的原因之一。 【参考文献】 　　［1］Snyder S.H，Bredt D.S.Biological roles of nitric oxide［J］.Sei Amer，2002，268（5）：28. 申明：本论文版权归原刊发杂志社所有，我们转载的目的是