PTEN，Bim蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义.docVIP

PTEN，Bim蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义 【关键词】 促凋亡基因,,PTEN,,Bim,,子宫内膜癌 【摘要】目的 探讨促凋亡基因PTEN Bim蛋白在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法　应用免疫组化SP方法和Western blot方法检测17例正常增殖期子宫内膜、11例非典型增生子宫内膜及52例子宫内膜癌中PTEN、Bim蛋白的表达。结果 Bim在正常子宫内膜中阳性表达率为100%，而在非典型增生内膜中阳性表达率开始下降（71.4%）,在子宫内膜癌组织中明显下降，（P0.05），而在子宫内膜癌各组织分级、临床分期及肌层浸润程度之间Bim蛋白表达阳性率均无明显差异(P0.05)。正常增殖期子宫内膜组织中PTEN表达量最多，随着内膜细胞的增殖程度的增加，PTEN表达量逐渐下降。〖HT5”H〗结论 〖HT5”K〗PTEN Bim蛋白表达改变与子宫内膜癌的发生密切相关。 【关键词】促凋亡基因 PTEN Bim 子宫内膜癌 1997年，一些研究机构报道了33%~55%的子宫内膜腺癌中存在肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase and tensin homology detected on chromosome ten )的突变失活，而且两个独立的研究机构同时发现PTEN突变存在于20%~30%的癌前病变中。这些研究结果提示PTEN突变与子宫内膜癌的发生密切相关，并使PTEN基因成为研究的热点，目前Mutter已将PTEN基因提升到子宫内膜的看家基因的高度。但PTEN基因突变导致子宫内膜癌发生的机制尚不明确。Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)是Bcl-2蛋白家族中仅含BH3区域的蛋白之一，功能为促进细胞凋亡。本研究探讨PTEN，Bim蛋白在子宫内膜癌中的表达，论述在子宫内膜癌发生过程中二者的关系。 1 资料与方法 1.1 研究对象 采用我院妇产科收治的子宫内膜病变患者63例。其中子宫内膜癌52例，子宫内膜非典型增生11例，选取同期宫腔镜手术获得的正常增殖期子宫内膜组织17例作为对照组，年龄为22～71岁。所有标本均经HE染色和组织学观察确定诊断，所有患者术前均未接受过放疗、化疗或激素治疗。其中子宫内膜癌按2000年FIGO分期标准进行临床分期：I期22例（其中2例无肌层浸润；13例肌层浸润≤1/2；7例肌层浸润≥1/2），II期12例，III期18例。病理分级：G1级25例，G2级15例，G3级12例。组织学类型均为子宫内膜腺癌。80例新鲜组织标本均为手术时立即取材，取材时所用器皿均经高压消毒处理。标本一部分经10%福尔马林固定，常规脱水、包埋，行HE染色，以供病理学检查。其余新鲜部分置液氮冷冻后，送-70℃深冻冰箱保存。 1.2 方法 1.2.1 实验试剂 一抗为鼠抗人PTEN单克隆抗体、鼠抗人Bim单克隆抗体，购于瑞士Alexis公司，SP即用型试剂盒、Western blot实验二抗（辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG）均购自北京中山生物技术有限公司，化学发光检测试剂盒为Nalgene公司产品。 1.2.2 实验方法 1)免疫组织化学检测：取上述组织标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm 厚度切片，连续切去4张制片，一张切片经HE染色再次经病理诊断证实。3张切片进行免疫组化染色。采用SP法，滴加一抗（工作效价:PTEN 1：100；Bim 1：500），并以PBS液置换一抗作为阴性对照。2)Western blot：取40ug总蛋白上样进行10%不连续SDS电泳。通过电转移法将蛋白从聚丙烯酰胺凝胶转印至硝酸纤维素滤膜上。10%脱脂奶粉于室温封闭滤膜过夜，常规将转印后的膜依次与一抗（1∶500稀释）和二抗（1∶5000稀释）孵育2h，最后以化学发光法显色目的条带。 1.3 结果判定 1．3．1 免疫组化结果判定 Bim及PTEN阳性细胞染色均为棕黄色颗粒，定位于细胞浆，镜下选择10个高倍视野的1000个内膜细胞，计算各视野阳性细胞的平均百分率，阳性细胞数为5%为阴性（0分）；5%~20%为弱阳性（1分）；20%~50%为阳性（2分）；50%~75%为强阳性（3分），75%为非常阳性（4分）。其中≥2分记为阳性。采用双盲阅片法。 1．3．2 Western blot结果判定 应用自动电泳凝胶成像分析仪（Chemi Imageer 5500）分析蛋白条带的强弱（以积分光密度值表示）。 1.4 统计学分析 采用SPSS812.0软件包进行t检验及单因素方差分析。 2 结果 2．1 不同子宫内膜组织中Bim的表达情况 在正常子宫内膜组织中，Bim呈阳性表达，非典型增生组织中表达开始减少，在高分化内膜腺癌中表达明显减少，而在中、低分化腺癌中减少不明显。见表1。表1