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生物医药毕业论文文献翻译：用探针为基础的胶体金免疫层析法快速检测渔业产品样本中的双鞭甲藻神经毒素可编辑
生物医药毕业论文文献翻译：用探针为基础的胶体金免疫层析法快速检测渔业产品样本中的双鞭甲藻神经毒素
Yu Zhou*,Feng-Guang Pan,Yan-Song Li,Yuan-Yuan Zhang,Jun-Hui Zhang,Shi-Ying Lu,Hong-Lin Ren,Zeng-Shan Liu
Key Laboratory of Zoonosis research,Ministry of Education,Institute of Zoonosis,Jilin University,Changchun 130062,PR China
Received 23 November 2008,Received in revised form 18 January 2009,Accepted 26 January 2009,Available online 2 February 2009
摘要? 一步免疫检测是使用胶体金标记单克隆抗体(单抗)的探头快速检测渔业产品样本中的双鞭甲藻神经毒素(PbTxs )的发展技术。这种免疫检测法是以竞争性地使用两个抗体为基础的.其中主要的抗体共轭连接胶体金(探测试剂) ,第二抗体(捕捉剂)共轭固定在定义检测区域内的硝酸纤维素膜上.样品中的毒素与有固定毒素结合的金标记单克隆抗体(控制线)竞争 。第二抗体(胶体金单克隆抗体毒素)在复杂的移动中可以被控制线捕获,但可以不被只含有牛血清白蛋白的PbTx (检测线)抓获。相关的PbTx样品中的浓度范围在10-4000纳克/毫升.加入标准溶液的样品进行检测,检测和视觉检测限为20毫微克毫升.在定性测试的基础上,视觉评价结果没有要求任何设备。 PbTx检测法时间不少于10分钟,适用于现场快速检测。
1.引言
双鞭甲藻神经毒素(PbTxs )是海洋生物神经毒素。它是由浮游赤潮毛藻产生的,至少有九个同族组成,根据它的聚醚骨干结构分为两组(类型为A和B)。在K.brevis的主要毒素是A型的PbTx -1,-7和-10和B型的PbTx -2 ,-3 ,-5 ,-6 ,-8和9( Wilson等,2008年)。这些毒素涉及到数以百万计的鱼类死亡,并成为人类的潜在毒素。消费使用含有pbTx贝类等食物很容易引起严重的神经性中毒(杰罗姆等, 2007) 。因此,有必要发展的分析方法来确定检测PbTxs。这有助于支持两个基础科学的研究和海鲜的检测.Up的支持,现在已经提出了几个生物样品PbTxs的免疫小鼠生物,基于免疫检测(卡特里特人, 1993年;波利伊特尔1995年; Marketal ,2002年),受体结合试验(VanDolah等,1994) ,细胞毒性试验(Manger等,1995),液相色谱仪加上质谱和串联质谱法( LC-MS/MS ) (晃等人,2003年;王等人, 2004年; Wilson等人,2008年) ,功能药理基础实验(劳伦斯等,2003 ),直接化学分析(迪基等,1999).
小鼠生物产生积极的结果只存在在贝类总PbTxs高的水平,它可能还不能完全反映或者已被证明这是一个直接测定PbTx代谢物的很好的分析方法. LC-MS/MS法已被证明是一个很好的新型干法直接测定的分析方法,以及最近提出一个普遍海洋毒素( Plakaset人,2002年)的分析方法。然而,这种方法需要昂贵的设备和熟练的分析师,而且样品制备是劳动密集型的消耗时间,这种方法受到实验室的科研限制。因此,有必要制定一个快速和经济的方法来检测PbTxs. 最近,我们已经发现了明显的特异性单克隆抗体(数据提交到另一个杂志)结合PbTxs.在这个研究中,我们描述了一步法基于胶体金免疫层析快速检测PbTxs的发展。
2.实验部分
2.1材料和试剂
硝基纤维素膜纸采购自Millipore.Filter公司 。羊抗鼠IgG抗体与牛血清蛋白(BSA)购买自北京。PbTx -1 , PbTx -2 , PbTx -3 , PbTx -9 ,雪卡毒素(纯度≥ 98 % HPLC法) ,冈田酸,微囊藻毒素LR和翅甲藻毒素(纯度≥ 95 % HPLC法)购买自Sigma。一种反PbTx单克隆抗体在我们的实验室中制备的。氯金酸( HAuCl4)和柠檬酸钠来自上海化学试剂(上海,中国) 。在这项研究中使用的缓冲液包括0.05 M的钠磷酸盐缓冲液(PBS , PH7.4 )和洗涤缓冲液。其他的试剂为分析纯,同时所有的实验用双蒸馏水。
2.2胶体金悬浮液的制备
将准备好的玻璃器皿用王水彻底清洗干净,并用纯化水冲洗,烘干备用。根据王某等人描述的过程,制备胶体金颗粒(20nm)( 2005年)。简言之, 0.01% l00mL氯金酸溶液(纯化水配制)在250 mL的锥形瓶中煮沸,然后将1.8mL 的1%柠檬酸钠
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