哺乳动物CYP450在大肠埃希菌上表达的研究进展.pdfVIP

医药导报２００８年９月第２７卷第９期 ·１０８３· ·药学进展 · 哺乳动物ＣＹＰ４５０在大肠埃希菌上表达的研究进展 王启斌，张志权，方建敏，陈永顺 （郧阳医学院附属太和医院药学部，湖北十堰　４４２０００） ［摘　要］　细胞色素Ｐ （ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ ，ＣＹＰ４５０）是人体内代谢各种内外源性物质最重要的酶系之一。随着分子 ４５０ ４５０ 生物学和重组技术的快速发展，对哺乳动物来源的细胞色素Ｐ ｃＤＮＡ进行精细操作并将使其在异源系统中表达成为可 ４５０ 能。目前已经有多种异源系统被用来进行哺乳动物ＣＹＰ４５０的表达，每一种系统都各具优缺点。哺乳动物ＣＹＰ４５０在大 肠埃希菌上的表达是在实验室中的主要表达方式，但采用不同方式表达的蛋白量不一样，而且对蛋白酶的活性也有着一 定的影响；同时，蛋白纯化手段的选择也会影响ＣＹＰ４５０表达方式的应用。该文对哺乳动物ＣＹＰ４５０在大肠埃希菌上的 表达纯化现状和应用进行概述。 ［关键词］　异源表达；ＣＹＰ４５０；大肠埃希菌 ［中图分类号］　Ｒ９１５　　　［文献标识码］　Ａ　　　［文章编号］　１００４０７８１（２００８）０９１０８３０３ 　　哺乳动物细胞色素Ｐ （ＣＹＰ）酶系是由一组结构和功能相 达，需要对ＣＹＰ的ｃＤＮＡ进行加工才能达到高产量的目的。除 ４５０ 关的超家族基因编码的同工酶；主要分布在动物的肝脏，全身 了对ｃＤＮＡ的５’和３’端的修饰外，还要修饰起始密码子以避 ［１］ 其他的组织也有分布。其生物功能极其广泛，除了对大量的内 免哺乳动物的ｍＲＮＡ形成２级结构 ，以及对部分碱基进行更 ［３］ 源性化合物进行氧化、过氧化以及还原代谢作用外，还能代谢 换，提高与Ｅ．ｃｏｌｉ序列的相似性达到提高表达的目的 。ＣＹＰ ［４］ 范围很广泛的外源化合物，包括临床上９０％的药物、环境污染 酶蛋白结合在细胞膜上认为和ＣＹＰ的氨基末端有关 ，但并非 ［１］ 绝对需要；天然的ＣＹＰ２Ｅ１在Ｅ．ｃｏｌｉ中能表达出具有催化活性 物和醇类 。 ［５］ Ｐ 酶系包括２种细胞色素：细胞色素Ｐ 和细胞色素ｂ５， 的蛋白酶 ，即使在去除了ＣＹＰ２Ｅ１的ｃＤＮＡＮＨ端编码第３ ４５０ ４５０ ２ 以及２种黄素蛋白：ＮＡＤＰＨ细胞色素Ｐ 还原酶和细胞色素ｂ５ ～２９个氨基酸序列的密码子后，仍可以得到具有活性的蛋白 ４５０ ［４］ 还原酶；此外还需要有磷脂等成分。细胞色素Ｐ 蛋白为整个 酶 ，且修饰后的蛋白仍然