外周血单个核细胞在乙肝病毒母婴传播中的作用.docVIP

外周血单个核细胞在乙肝病毒母婴传播中的作用 作者：胡静,韩国荣 单位：1.东南大学 临床医学院,江苏 南京 210009;2.东南大学附属南京第二医院 妇产科,江苏 南京 210009 【摘要】目的 探讨母婴单个核细胞（PBMC）中乙肝病毒DNA （HBVDNA）与血清HBVDNA之间的关系。方法 选择血清HBVDNA阳性产妇55例，依据入院时血清HBVDNA的检测结果分为病毒高载量组（ge;106copiesbull;ml-1,n=25）和低载量组(lt;106copiesbull;ml-1,n=30)，分别提取产妇外周血及新生儿脐血中PBMC，荧光定量PCR法测定两者中HBVDNA。另外选择乙肝病毒标志物阴性的产妇及其新生儿10例作为阴性对照组。结果 阴性对照组母婴PBMC及血清HBVDNA均阴性。病毒高载量组产妇的新生儿血清HBVDNA阳性率为20%(5/25)，低载量组产妇的新生儿血清HBVDNA均阴性，两组新生儿间血清HBVDNA阳性率差异有统计学意义（Plt;0.05）；病毒高载量组产妇PBMC HBVDNA阳性率高于低载量组(分别为84.0%和43.3%,Plt;0.05)；PBMC HBVDNA阳性产妇的新生儿脐血PBMC HBVDNA阳性率明显高于PBMC HBVDNA阴性产妇的新生儿（Plt;0.05）。有4例新生儿中脐血PBMC HBVDNA及血清HBVDNA均阳性，11例仅脐血PBMC HBVDNA阳性，1例仅血清HBVDNA阳性。结论 血清HBVDNA阴性的新生儿其PBMC HBVDNA可独立阳性；在检测母婴血清HBVDNA的基础上进行母婴PBMC HBVDNA的检测是高危母婴筛查的重要补充，可弥补目前新生儿宫内感染诊断的不足。 【关键词】 乙肝病毒；DNA；宫内传播；单个核细胞；血清；病毒载量 乙型肝炎(简称乙肝，Hepatitis B,HB)是一种严重危害人类健康的世界性传染病，我国是乙型肝炎高发区，HBsAg阳性携带者中，40％～50％来源于母婴传播［1］。近年来外周血单个核细胞（PBMC）在乙肝母婴传播中的作用是一个热点问题，许多学者针对新生儿PBMC乙肝病毒（HBV）感染对母婴传播的影响进行了研究。本实验在此基础上研究了HBVDNA阳性产妇及其新生儿PBMC HBVDNA与血清HBVDNA之间的关系。 1 资料与方法 1.1 研究对象 选取南京市第二医院住院分娩的血清HBVDNA阳性的产妇及其新生儿55例，依据入院时血清HBVDNA的检测结果分为病毒高载量组（ge;10 6copiesbull;ml-1,n=25）和低载量组(lt;106copiesbull;ml-1,n=30)。所有产妇孕28周起予HBIG 200IU注射，每2周1次。另外，选择乙肝病毒标志物阴性的产妇及其新生儿10例作为阴性对照组。有以下情况的产妇及其新生儿不在此研究范围：产妇患有产科并发症、内科并发症；产妇孕期曾予特殊药物治疗；胎儿异常和（或）畸形。 1.2 标本的收集与处理 分别采集产妇静脉血和新生儿脐带抗凝血各10ml，用生理盐水对倍稀释后缓慢加入等体积淋巴细胞分离液（购自北京索莱宝科技有限公司），于水平离心机上以2000rbull;min-1离心20min，用毛细吸管轻轻取出位于血浆与分离液界面层呈白膜状的PBMC，加入生理盐水20ml混匀，在水平离心机上以1500rbull;min-1离心5min，倒去上清液，如此重复3次，重悬后-70℃冻存备用。新生儿于免疫注射前取静脉血2ml测血清HBVDNA，产妇血清HBVDNA检测在门诊检验科完成。阴性对照组产妇及其新生儿同时同方法采血检测。 1.3 PBMC中DNA的提取 将冻存PBMC水浴解冻后提取细胞内DNA，并进行DNA荧光定量测定。DNA提取试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司，具体操作按试剂盒说明书进行。 1.4 HBVDNA的测定 血清HBVDNA检测采用荧光定量PCR法检。试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司，每次检测均设阳性、阴性及空白对照，具体操作按试剂盒说明书进行。 1.5 统计学处理 所有数据均用SPSS15.0软件处理，检验水准alpha;=0.05，率的比较用chi;２检验。 2 结 果 2.1 阴性对照组产妇及其新生儿血清HBVDNA和PBMC HBVDNA检测 阴性对照组产妇血清和PBMC HBVDNA均阴性，新生儿血清和脐血PBMC HBVDNA亦均为阴性。 2.2 产妇血清HBVDNA载量与其新生儿血清HBVDNA的关系 病毒高载量组产妇的新生儿血清HBVDNA阳性率为20%(5/25)，低载量组产妇的新生儿血清HBVDN