动物生理学实验教材12免疫组化生长抑素.pptVIP

免疫组化法检测小鼠脑组织生长抑素的分布 一、有关免疫组织化学方法的原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。 它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等) 免疫组织化学的全过程包括： 1.抗原的提取与纯化； 2.免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化； 3.将显色剂与抗体结合形成标记抗体； 4.标本的制备； 5.免疫细胞化学反应以及呈色反应； 6.观察结果。 免疫组织化学的方法 （一）酶标记抗体组化法 1、基本原理：通过共价键将酶连接在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位。 根据酶标记的部位可将其分为： 直接法（一步法） 间接法（二步法） 桥联法（多步法） 根据的方式： 抗原-抗体连接：过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP) 亲和连接：卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC)