工业微生物接种技术 知识 .ppt

项目二 微生物无菌操作及接种技术;;物品：高压湿热灭菌 操作者：无菌工作服、鞋、帽、口罩 环境 操作;（一）操作者;对于我们制药工业来说，在口服药和局部药制备过程中，要求操作人员清洗和消毒双手，穿上专用工作衣帽进行操作，既可减少微生物污染。但在制备无菌要求高的注射剂和眼用、耳用溶液时要求操作人员操作前穿上全套的工作衣帽包括操作衣、裤、靴子、帽、面罩和手套。此外不允许带菌者操作。;无菌环境;（1）无菌室的结构： 密封、避光，设百叶通气窗，侧面底部设进气孔 应有缓冲间(外间)、操作间 安装拉门;（2）无菌室内的设备 缓冲间、操作间安装日光灯和紫外灯，紫外灯距地高度2.0-2.2m; 缓冲间内放置工作服、鞋、帽、口罩，消毒用药物； 超净工作台，内备接种用常用器具;酒精灯、接种环、打火机或火柴、记号笔、镊子、酒精棉球瓶;（3）无菌室的消毒和防污染 无菌室内空气测试应基本达到无菌。 使用前后紫外线照射均照射30min 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时） 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 ;（4）无菌室空气污染情况的检验 使用前或操作后检查，应无杂菌； 若杂菌多为霉菌时，应通风干燥；杂菌多为细菌时，乳酸熏蒸效果较好。;（5）无菌室操作规则 操作前打开缓冲间和操作间的紫外灯30min; 器材和用品一次性全部放入无菌室，避免在操作过程中进出无菌室或传递物品. 进入缓冲间，换好工作服、鞋、帽、口罩，手消毒 无菌操作 操作后收拾台面，紫外灯照射。;2、超净工作台;垂直流超净工作台 ;超净台的使用与维护;（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。 ;接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程。;（一）接种的基本程序;斜面接种 液体接种 穿刺接种 平板接种 ;1. 斜面接种 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。 用于好气性微生物的接种，可进行好氧微生物的形态观察或菌种保藏;1.消毒： 手和台面用75%酒精棉消毒 2.标记： 接种前在距离试管口2-3cm位置注明菌名、接种日期、 接种人姓名 3.整理台面： 左手用的物品放左手边，右手用的物品放右手边，酒 精灯位于中央；无菌物品左手边，用过的放右手边。 4.点燃酒精灯。;5.接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌：见图4-13，三步。;;;;;斜面接种示意图;由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作方法： 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉塞再轻轻摇匀。 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种 ;用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。 用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种 只适宜于细菌和酵母的接种培养;穿刺接种方法： （1）消毒 （2）标记 （3）整理台面 （4）点燃酒精灯 （5）接种 1）手持试管 2）旋松棉塞 3）接种针灼烧灭菌，把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌 ;4）拔出棉塞 5）取菌：用冷却接种针的针尖沾取少量菌种 6）穿刺：水平法和垂直法。 将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养基， 至接近试管底部，然后沿接种线拔出 7）塞上棉塞 8）接种针灼烧灭菌;（1）划线接种;分区划线法;连续划线法;稀释法：微生物分离、纯化 稀释倒平板法:菌悬液稀释—不同梯度的稀释液少许与培养基混合—摇匀—倒培养皿中 稀释混合平板法（倾注法）：稀释—培养皿中加入不同梯度的菌悬液1mL—加45℃左右的培养基—摇匀 稀释涂布平板法：倒平板----稀释----接种0.1mL—涂布;各种接种方法的用途;　4.平板划线接种法 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本。 连续划线法：适用于含菌量较少的标本。; 5.涂布接种法：用于分离、测定标本中活菌数和药敏实验细菌接种 6.倾注培养法：用于活细菌计数。 ; ; 获得纯培养的方法： ;3、单细胞挑取法 ;4、组织分离法;⑶接种：把组织块分割成小块，放到平板培 养基表面。每个平皿中放入3-5个小组织块 ⑷培养:适温培