疏水层析课件.pptVIP

疏水作用层析Hydrophobic Interaction ChromatographyHIC ;疏水层析的概念及原理 疏水层析与反相层析 疏水层析过程 疏水层析在蛋白质纯化中的重要性 疏水层析的发展趋势 ;疏水层析的概念及原理; 疏水层析的原理完全不同于离子交换层析或凝胶过滤层析等技术，使该技术与后两者经常联合使用来分离复杂的生物样品； 目前该技术主要应用领域是在蛋白质的纯化方面，成为血清蛋白、膜结合蛋白、核蛋白、受体、重组蛋白等，以及一些药物分子，甚至细胞等分离时的有效手段。 ;疏水层析原理：; 高浓度盐与水分子发生强烈作用，导致疏水分子周围形成空穴的水分子减少，促进疏水性分子与介质的疏水配基之间发生结合。;; 蛋白质等生物大分子与HIC介质的结合不仅取决于分子疏水性表面的比例，还与疏水微区的分布有关; 一般来说每个分子被吸附的过程都会有一个以上的配基参与，换句话说，分子在介质上发生的结合是多点结合。;疏水层析与反相层析;反相层析： 与基质结合的配体密度大，疏水性强，对蛋白质类物质具有较大的吸附力； 欲将吸附物解析下来，须用含有机溶剂的流动相(降低极性)洗脱，方可见效； 洗脱液的极性降低，常常会引起大分子活性物质变性； 因此反相层析一般较适合分离纯化小分子质量的肽类和辅基等物质。; 介质的选择 样品的准备 层析条件的优化 层析介质的再生、清洗和贮存 ;介