第五章固定化酶pdf.doc

第五章 固定化酶 第一节 概述 第二节 固定化酶的性质及其影响因素 第三节 固定化酶的制备 第四节 固定化细胞 第五节 固定化辅酶和原生质体 第六节 酶反应器和固定化酶（细胞） 的应用 第一节 概述 酶催化的缺陷 （1）酶的稳定性较差 （2）酶的一次性使用 （3）产物的分离纯化较困难 设 想 ——如果能设计一种方法，将酶束缚于特殊 的相，使它与整体相（或整体流体）分 隔开，但仍能进行底物和效应物（激活 剂或抑制剂）的分子交换。 ——这种固定化的酶既具有酶的催化特性， 又具有一般化学催化剂能回收、反复使 用等优点，并且生产工艺可以连续化、 自动化。 进 展 1916年Nelson和Griffin利用活性炭吸附蔗糖酶 固定化酶的研究从20世纪50年代开始 1953年德国的Grubhofer和Schleith采用聚氨基苯 乙烯树脂为载体，经重氮法活化后，分别与羧肽 酶、淀粉酶、胃蛋白酶、核糖核酸酶等结合，而 制成固定化酶。 20世纪从60年代起，固定化酶的研究迅速发展 1969年，日本的千细一郎首次在工业生产规模应 用固定化氨基酰化酶从DL-氨基酸生产L-氨基酸， 实现了酶应用史上的一大变革。 进 展 经过40多年的研究和发展，酶的固定化技术取得 了长足的进步。它不仅在理论研究（如阐明酶作 用机理）上发挥独特作用，在实际应用上也显示 出强大威力。 ——用这种技术不仅能稳定酶，改变酶的专一性、 提高酶活力，从而改善酶的种种特性，使之更符 合人类要求，而且还能创造适应特殊要求的新酶。 现状 人们对固定化酶极感兴趣，因为其性 质比可溶性酶及其相关技术优越，对固定 化酶的利用也与日俱增。 固定化酶的定义 所谓固定化酶，是指在一定空间内呈 闭锁状态存在的酶，能连续地进行反应， 反应后的酶可以回收重复使用。 什么是固定化酶？ 水溶性酶 水不溶性载体 固定化技术 水不溶酶 （固定化酶） “水不溶酶”（water insoluble enzyme） “固相酶”（solid phase enzyme） 固定化酶正式定名 在1971年第一届国际酶工程会议上，正 式建议采用“固定化酶”（immobilized enzyme）的名称。 固定化酶与游离酶相比，具有下列优点:  （l）极易将固定化酶与底物、产物分开； （2）可以在较长时间内进行反复分批反应和装柱 连续反应； （3）在大多数情况下，能够提高酶的稳定性； （4）酶反应过程能够加以严格控制； （5）产物溶液中没有酶的残留，简化了提纯工艺； （6）较游离酶更适合于多酶反应； （7）可以增加产物的收率，提高产物的质量； （8）酶的使用效率提高，成本降低。 缺点  （l）固定化时，酶活力有损失； （2）增加了生产的成本，工厂初始投资大； （3）只能用于可溶性底物，而且较适用于小分子 底物，对大分子底物不适宜； （4）与完整菌体相比不适宜于多酶反应； （5）胞内酶必须经过酶的分离程序。 固定化酶的优缺点 第二节 固定化酶的性质及其影响因素  一． 影响固定化酶性质的因素 二． 固定化后酶性质的变化 三． 评价固定化酶的指标  固定化是一种化学修饰，酶本身的结 构必然受到扰动，同时酶固定化后，其 催化作用由均相移到异相，由此带来的 扩散限制效应、空间障碍、载体性质造 成的分配效应等因素必然对酶的性质产 生影响。 一． 影响固定化酶性质的因素 1．酶本身的变化，主要是由于活性中 心的氨基酸残基、高级结构和电荷状态 等发生了变化。 2．载体的影响 （1） 分配效应 （2） 空间障碍效应 （3） 扩散限制效应 3. 固定化方法的影响 二．固定化后酶性质的变化 1. 固定化对酶活性的影响 固定化酶的活力在多数情况下比天然 酶小，其专一性也可能发生改变。  例如 用羧甲基纤维素作载体固定的胰蛋白酶， 对高分子底物酪蛋白只显示原酶活力的30%， 而对低分子底物苯酞精氨酸-对硝基酰替苯胺 的活力保持80%。所以，一般认为高分子底 物受到空间位阻的影响比低分子底物大。 在同一测定条件下，固定化酶的活力要低于 等摩尔原酶的活力的原因可能是： ①酶分子在固定化过程中，空间构象会有所变化，甚 至影响了活性中心的氨基酸； ②固定化后，酶分子空间自由度受到限制（空间位 阻），会直接影响到活性中心对底物的定位作用； ③内扩散阻力使底物分子与活性中心的接近受阻； ④包埋时酶被高分子物质半透膜包围，大分子底物不 能过膜与酶接近。  值得注意的是 ——也有个别情况，酶在固定化后反 而比原酶活力提高。 ——原因可能是偶联过程中酶得到化 学修饰，或固定化过程提高了酶的稳定性。 2．固定化对酶稳定性的影响 稳定性是关系到固定化酶能否实际应 用的大问题，在大多数情况下，酶经过固定 化后一般都有较高的稳定性、