复制分子生物学.pptxVIP

当染色质重建时，已经与核小体结合的DNA 展开使两子链复制。那么，此位点上原来存在的核小体如何变化呢？组蛋白八聚体是解离成自由组蛋白重复使用，还是保持组装状态呢？ 原组蛋白八聚体没有被保留。解聚与重组的方式远不清楚。;核小体在DNA 上的位置有特异性吗？现在已经清楚，组蛋白八聚体在DNA 上组装并不是与序列无关的随机结合，有些情况下模式通过内部途径实现，定位取决于DNA 的结构特征；有些情况下模式通过外部途径达成，定位取决于其它蛋白质与DNA 或/和组蛋白的相互作用。;历史上曾经提出过DNA复制的3种假设;In 1958, Meselson and Stahl provided the experimental proof for the semiconservative model of DNA replication （著名实验：用同位素标记，密度梯度离心。） 大肠杆菌在含有15NH4Cl为唯一氮源的培养基上生长多代，这时DNA中的嘌呤和嘧啶中的氮几乎全是15N。然后将大肠杆菌转移到含有14NH4Cl的培养基中，在不同的间隔时间，收集细菌并裂解，提取DNA，并用CsCl梯度密度超速离心进行分析（这种方法可以分辨在密度上存在0.01g/mL差异的生物大分子）。;上述实验证明新合成的DNA同时含有15N和14N，因此DNA的复制不可能是全保留复制。 为了证明DNA复制不是分散复制， Meselson and Stahl 进行了进一步的实验，他们将15N标记的细菌在14N培养基上保持一代，然后提取DNA，加热到100度，使DNA双链变性为单链，再对变性的单链进行CsCl梯度密度超速离心，发现了两条分开的条带，表明一条链是15N标记的，另一条链是14N标记的，因此DNA复制是半保留复制，而不是分散复制。; 在DNA复制过程中复制区域双螺旋解旋并分开，以每条单链为模板，按碱基互补配对原则，由DNA聚合酶催化合成新的互补链，结果由一条链成为互补的两条链，这样新形成的两个DNA分子与原来的DNA分子的碱基序列完全相同。 由于每个子代DNA的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的。这种复制方式称为半保留复制。 ;过程复杂；需要多种酶和蛋白质参与（包括拓扑异构酶、解旋酶、单链DNA结合蛋白、引物合成酶、DNA聚合酶及连接酶等）。;DNA半保留复制的生物学意义: DNA replication by semi-conservation makes the two daughter duplexes have the same sequence as the parental duplex. Thus,genetic message of organism keeps relative stable. DNA is much more stable than other components in cell. This is consisted with its function——carrier of genetic message.;The origin of replication（复制起始点 ）： a sequence of DNA at which replication is initiated（即 DNA复制起始发生的位点） . 复制从特定位点开始，双螺旋的两条链分开形成两条DNA模板，逐步向未复制部分扩大； 刚分开的两条模板链与未复制的双链之间的连接区（即正在复制的分叉部位）称为复制叉（ replication fork ）。 The replicon （复制子） is the DNA under the control of one origin of replication. Any piece of DNA which replicates as a single unit is called a replicon.（即具有一个复制起点, 作为一个复制单位的DNA。）;DNA链的复制过程示意图;DNA的单向复制只在噬菌体和某些质粒中观察到了;Autoradiograph of replicating Bacillus subtilis DNA;J. Huberman and A. Tsai’s experiment: Fruit fly Drosophila melanogaster First with high levels of 3H-thymidine Second with light level label;复制速率 真核生物：复制叉移动速率1kb-3kb/min，有多个复制起始点，可进行多复制子的同步复制。 原核生物：复制叉移动速率50kb/min，每个复