的非色谱纯化.PDFVIP

Research Paper 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 52 (1) :90 － 95 ; 4 January 20 12 ISSN 000 1 － 6209 ; CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn 以类弹性蛋白 多肽 为标 签 的表 达 质 粒构建 及 其用于 木聚 糖 酶 的非色谱纯化 * ， ， 付 晓平 王文研 张光亚 ， 36 102 1 华 侨 大 学化 工学院生物工程 与技术 系 厦 门 : 【 】 ， (ELPs) 摘要 目的 旨在 构建一个 能 以非色谱纯 化目标 蛋白 的表达 质粒 使用自 行 设计 的类弹 性蛋白 多肽 ， 。 ELPs ， 。 【 】 ， 作 为非色 谱纯 化 标签 以纯化目 标 蛋白 该 长 度 短 对 盐 非常 敏 感 方 法 从 头 设计 了木聚 糖酶 将 ELPs ， ， pET -22 b-SoxB-M2 - 其通 过 一段无 规 则卷 曲同 相连 合成 了编码 上 述 序列 的基 因 并 构 建重组 表达 载 体 S-ELP ， BLR (DE3 ) ， ， 转化 至 大肠 杆菌 中诱 导表达 采 用可 逆 相 变 循环 经 高速 离 心 纯 化 木聚 糖酶 并 考 察 纯 酶 。 【 】 ， pH = 7. 0 0. 5 mol / L ELPs 的酶 学性质 结果 成 功构建 了表达 载 体 并表达 在 时 碳 酸 钠 可使 的相 变 温 度 降 22 ℃ 。 ， ， 3. 2 ， 2 1. 2 % ， 64 . 3 % 。 至 在 上述 条件 下 对木聚糖酶进 行了 非色谱纯 化 其纯 化倍 数为 回收率 为 纯度为 ， ELPs 、 ， 60 ℃ ， pH 6. 0 ， 经测 定 未连接 的酶 粗 酶及 纯化 酶 学性质基本 一 致 其 最 适温 度为 最 适 为 最 适 反应 时 30 min ， 70 ℃ 1 h 50 % ， ， 。 【 】ELPs 间为 粗 酶 保温 相对 酶活仍有