积雪草抗老年性痴呆有效部位的筛选及药理作用的分析-screening of effective fractions of centella asiatica against senile dementia and analysis of its pharmacological effects.docx

中 文 摘 要目 的：对积雪草不同提取部位进行体外抗老年性痴呆（AD）筛选，确 定有效部位，并研究其抗AD相关药理作用。从实验动物记忆行为学指标 来探究有效部位对快速老化模型小鼠SAMP8记忆行为的改善作用；探究 其对SAMP8小鼠体内自由基代谢和APP、BACE-1基因表达的影响，为研 究和开发积雪草成为新的抗AD药物提供科学依据。方 法：1. 积雪草有效部位体外筛选：采用MTT法体外测定积雪草不同 提取部位对小鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株细胞PC12增殖的影响。2. 体外抗 AD的作用研究：采用MIT法检测积雪草乙酸乙酯部位对Aβ25-35片段造成 PC12细胞的损伤模型的增殖作用，Hoechst 33258染色后，用荧光显微镜观 察积雪草乙酸乙酯部位作用细胞损伤模型的形态学变化。3．急性毒性实验（MTD测定）：给实验小鼠灌服最大浓度和最大容量的积雪草乙酸乙酯部 位，测定小鼠灌胃的最大耐受量。4. 体内抗老年性痴呆（AD）作用研究： 采用Morris水迷宫方法以寻求次数、逃避潜伏期、平台象限比等为指标对 小鼠记忆行为进行检测，观察中药积雪草乙酸乙酯部位对小鼠行为学的 影响。用Elisa法测定药物对小鼠脑组织中SOD、GSH-PX的影响；采用半 定 量 反 转 录 聚 合 酶 链 反 应 (RT-PCR) 测 定 SAMP8 鼠 脑 内 APP,BACE-1mRNA含量。结 果：1. 通过 MTT 法，筛选出积雪草有效部位为乙酸乙酯部位。2. 体 外抗 AD 的作用研究显示：①在 PC12 细胞致 AD 模型的预防作用实验中， 乙酸乙酯部位对细胞有保护作用，通过荧光显微镜观察到用药组的凋亡 细胞少于对照组与 MTT 的结果相符；②在 PC12 细胞致 AD 模型的治疗作 用实验中，乙酸乙酯部位对细胞有保护作用，通过荧光显微镜观察到用 药组的凋亡细胞少于对照组与 MTT 的结果相符。3. 急性毒性实验结果表 明，小鼠灌胃给药的最大给药量为每日 32g 生药，相当于成人日用量的 3200 倍。4. 体内抗 AD 作用研究显示：Morris 水迷宫学习能力测试：⑴游泳能力测定结果显示，各组间比较无明显差别（P0.05）。⑵定位航行实验：① 模型对照组逃避潜伏期与其他各相比明显延长；中剂量组逃避 潜伏期与模型对照组比较明显低于模型对照组（P0.01）。② 模型对照 组寻求次数均低于其他各组；中剂量组与模型对照组的比较明显高于模 型对照组（P0.01）。③ 模型对照组平均停留时间明显比其他给药组短； 中剂量组与模型对照组比较明显长于模型对照组（P0.01）。④ 模型对 照组平台象限比明显低于中剂量组（P0.01）。⑶脑组织相关酶学指标测 定：①SOD 测定：除低剂量组外其他各组与模型对照组比较均有显著性 差异（P0.05）。②GSH-PX 测定：中剂量组及 Hup-A 组与模型对照组比 较有显著性差异（P0.05），其他两组与模型对照组相比都无差异。⑷脑 组织相关痴呆基因指标测定：①BACE-1 测定：Hup-A 组及中剂量组与模 型对照组比较有非常显著性差异（P0.01），高剂量与模型对照组比有显 著性差异（P0.05），低剂量组与模型对照组比较无显著差异。②APP 测 定：除高剂量组和低剂量组外，其他两组与模型对照组相比有显著性差 异（P0.05）。结论：1. 积雪草乙酸乙酯部位在体外对PC12细胞有较好的保护作用；并且 对由Aβ25-35片段引起PC12细胞的损害也有较好的保护和治疗作用。2. 积雪草乙酸乙酯部位有一定的抗脑痴呆的作用，其作用的机制可能 与改善小鼠的学习记忆能力，提高小鼠的抗氧化能力以及抑制 APP、BACE-1 基因的表达有关。关键词: 积雪草乙酸乙酯部位；AD；PC12细胞株；Aβ片段；基因表达Screening effective parts of Centella asiatica and studying its pharmacological effects on Alzheimers diseaseAbstractObjective: To scree effective parts of Centella asiatica and study its pharmacological effects on Alzheimers disease.Methods: 1. Screening effective parts of Centella asiatica in vitro: MTT assay was adopted to study the proliferation of PC12 cell with treatments of diffrent parts of Centella asiati