家蝇短型肽聚糖识别蛋白基因克隆与功能鉴定-cloning and functional identification of musca domestica short peptidoglycan recognition protein gene.docxVIP

I I 摘 要 摘 要 家蝇在地球上广泛分布，常常生长在病菌滋生的环境中，对环境的适应能力 很强。肽聚糖识别蛋白（PGRPs）是先天免疫分子，存在于昆虫，软体动物，棘 皮动物和脊椎动物之中，而不存在于线虫和植物中。它可以与细菌细胞壁的主要 成分肽聚糖结合，通过激活 Toll 或 Imd 信号转导途径，或诱导蛋白水解级联反 应产生抗菌蛋白，引起吞噬作用，水解肽聚糖来抵挡感染。对家蝇肽聚糖识别蛋 白功能的研究对了解家蝇的抗菌机制有着重要意义。本文以家蝇为研究对象，研 究内容主要包括以下两个部分： 第 1 部分：通过对转录组数据库进行搜索，发现了 5 条新的肽聚糖识别蛋白 基 因 序 列 ， 使 用 PCR 技 术 对 其 序 列 进 行 验 证 ， 通 过 同 源 比 对 分 别 命 名 为 MdPGRP-SA、MdPGRP-SB、MdPGRP-SC2、MdPGRP-SC3 和 MdPGRP-SD，并 对其核苷酸和编码的蛋白序列进行了生物信息学分析。 第 2 部 分 ： 以 管 家 基 因β-actin 作 为 内 参 分 子 ， 利 用 实 时 荧 光 定 量 PCR （RT-qPCR）方法对经过金黄色葡萄球菌和大肠杆菌刺激后的家蝇以及不同组 织，不同发育阶段的家蝇中 PGRP 基因的 mRNA 表达水平进行了定量研究。结 果发现，与对照组相比 MdPGRP-SA、MdPGRP-SB 和 MdPGRP-SD在金黄色葡萄 球菌刺激后发生表达上调，随后出现一个恢复，最后再次显著上调；在大肠杆菌 刺激后，MdPGRP-SA 在后期发生上调，而 MdPGRP-SB 和 MdPGRP-SD基因在 刺激初期发生上调，随后表达逐渐恢复正常。MdPGRP-SC2 和 MdPGRP-SC3 在 金黄色葡萄球菌刺激后，相对表达量对照组相比没有明显差异，而在大肠杆菌的 刺激后，初期出现明显下调，随后逐渐恢复。这些结果表明这些基因在对抗细菌 入侵过程中发挥了重要作用，同时对 5 个基因在家蝇不同组织与不同发育阶段的 表达分析也为研究它们的功能提供了参考。 关键词：家蝇；先天免疫；肽聚糖识别蛋白；基因定量 II II Abstract Abstract Houseflies are widely distributed on the earth, they often live in the environment with much bacteria and has a strong adaptability to the environment. Peptidoglycan recognition proteins (PGRPs) are innate immunity molecules present in insects, mollusks, echinoderms, and vertebrates, but not in nematodes or plants. The PGRP can combine with peptidoglycan which is an important component of bacterial cell wall. PGRP activate the Toll or immune deficiency (Imd) signal transduction pathways or induce proteolytic cascades that generate antimicrobial products, induce phagocytosis, hydrolyze peptidoglycan, and protect organisms against infections.Research the function of Peptidoglycan recognition proteins has important significance in realizing the antibacterial mechanism.This thesis study with housefly, contains 2 primary parts. Part 1: The Peptidoglycan recognition proteins from housefly were searched from transcriptome database and 5 new sequences were found, we used PCR to To verify this sequence. According to the results of sequence alignments analysis,