微生物 第7章课件.pptVIP

1）营养缺陷型（auxotroph）： 野生菌株发生基因突变，丧失合成一种或几种生长因子或碱基、氨基酸的能力，不能在基本培养基生长繁殖。 二、常见的突变类型 用hisC-和hisC+，分别表示组氨酸缺陷型和野生型。 2）抗性突变型： 野生型菌株发生基因突变，产生对某种化学药物或致死物理因子的抗性变异， strR 3）条件致死突变型：菌株发生基因突变后，在某种条件下正常生长、繁殖而在另一条件下无法生长繁殖。 4）其它突变类型： 形态突变型、抗原突变、毒力突变、产量突变 7、可逆性：突变的菌株可发生回复突变 三、基因突变的特点 1、自发性:自发的产生 2、不对应性：突变性状与突变的原因间无对应关系 3、稀有性：10-6-10-9 5、可诱变性：诱变剂可增加突变 6、稳定性：突变的新性状可稳定遗传 4、独立性：某一基因突变与其他基因无关 四、基因突变自发性和不对应性的实验证明 变量实验 涂布实验 影印实验 野生型 （原始性状） 突变型（适应环境的新性状） 突变的原因 ？ 证明突变是自发产生的，并且突变的性状与引起突变的原因间无直接对应关系。 涂布实验：Newcombe（1949） 突变原因与性状相关 影印实验：Joshua Lederberg and Esther Lederberg（1952） 五、紫外线对DNA的损伤及其修复 嘧啶 嘧啶二聚体 UV 紫外线对DNA的损伤 DNA损伤的修复作用 1）光复活作用 嘧啶二聚体 嘧啶 光解酶 2）切除修复 （一）自发突变与育种： 生产中选育 ：正变株 定向培育：卡介苗 六、突变与育种 （二）诱变育种 1、诱变育种的基本环节 2、诱变育种的原则（P214） 诱变剂 物理因素 化学因素 紫外线 激光 离子束 X射线 r射线 快中子 烷化剂 碱基类似物 吖啶化合物 3、Ames试验： 利用细菌营养缺陷型的回复突变检测化学致癌物。 回复突变：突变体失去的野生型性状，可以通过第二次突变得到恢复，这种第二次突变称为回复突变 化学药剂的三致作用：致突变、致畸变、致癌变 原理：鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhmurium)组氨酸营养缺陷型菌株(his-)在基本培养基的平板上不能生长，如化学致癌物诱变后发生回复突变，成为原养型(his+)后则能生长。 应 用：食品、饮料、药物、饮水、环境试样中的致癌物 4、突变株的筛选（P220-223）： （1）营养缺陷型突变株的筛选 三类培养基： 基本培养基[-]、完全培养基[+]、补充培养基[A]或[B] 三类遗传型： 诱变 回变或重组 野生型———— 营养缺陷型——————原养型 [A+B+] [A-B+]或[A+B-] [A+B+] 突变株的筛选方法 诱变 检出营养缺陷型 淘汰 野生型 鉴定营养缺陷型 富集培养 （抗生素法） （菌丝过滤法） 影印平板法 夹层培养法 限量补充培养法 逐个检出法 生长谱法 2. 抗药性突变株的筛选（P218-220）-自学 3. 产量突变株（P218-219）-自学 第三节 基因重组和杂交育种 一、原核生物的四种基因重组形式: 转化(transformation)： 转导(transduction)： 原生质体融合（protoplast fusion） 基因重组（gene recombination）： 两个独立基因组内的遗传基因通过一定的途径转移到一起，经过遗传分子间的重新组合，形成新的稳定基因组的过程. 接合(conjugation): （一）、转化(transformation) 定义：受体菌直接吸收供体菌的DNA片段而获得后者部分遗传性状的现象。通过转化形成的杂种后代称转化子. 2、自然转化的条件： 1) 建立了感受态的受体细胞 2) 外源游离DNA分子（转化因子） 感受态（competent）：受体细胞最易接受外源DNA片段并能实现转化的一种生理状态。 涉及细菌染色体上几十个基因的功能及彼此间的相互协调。感受态因子、细胞壁自溶素、 DNA结合蛋白、核酸酶. 1）感受态的出现 2） DNA的结合与进入 3） DNA 的整合 肺炎链球菌（S. pneumoniae）转化过程 3、人工感受态和转化 CaCl2处理 PEG 处理 电穿孔：高压脉冲电流激破细胞膜 基因枪： 人为地使其处于一种可以摄取外源DNA的“人工感受态”。 难进入自然感受态的细菌：大肠杆菌等 用提纯的病毒核酸感染宿主细胞或其原生质体，并产生正常病毒后代的现象。 5、转染(transfection)： 转染的是病