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微生物接种与培养 目录 一、微生物实验室的重要性 二、微生物实验基本概念 三、微生物检验基本流程 四、微生物的接种 五、微生物的培养 六、培养箱分类与应用 一、微生物实验室的重要性 实验室生物安全涉及的绝不仅是实验室工作人员的个人健康，极有可能会给人群、动物或植物带来不可预计的危害。 一、微生物实验室的重要性 微生物检测的目的： 1、衡量食品卫生质量,判定被检食品能否食用 2、判断食品加工环境及食品卫生环境,评价食品被污染的程度,为各项卫生管理工作提供科学依据,提供传染病和人类,动物和食物中毒的防治措施. 3、防止或者减少食物中毒人畜共患病的发生 4、提高产品质量,避免经济损失,保证出口等 1、保证药品内在质量 2、控制致病菌的污染 为感染性疾病提供微生物学诊断，以达到治疗、控制和预防感染病的扩散 二、微生物实验基本概念 基础知识 名词 定义 微生物 是一切肉眼看不见或看不清的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。包括细菌、真菌、病毒和显微藻类等。 培养基 是由人工方法配置而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。基本成分：碳源、氮源、无机盐和水等。 接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 菌落 单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌种鉴定的重要依据 三、微生物检验基本流程 微生物检验前的准备： 仪器、试剂、无菌室或超净工作台灭菌、工作衣物等灭菌 无菌取样 样品均质 样品稀释 样品接种 恒温培养 结果观察 四、微生物接种 无菌操作： 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针、接种环和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌胎或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫无菌接种操作。 在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 无菌操作的目的： 1、防止试验操作中人为污染样品； 2、二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 四、微生物接种 接种工具： 实验准备： 1、无菌室或超净工作台 2、接种环、接种针、玻璃涂棒等 3、酒精灯/红外线灭菌器 4、培养基、培养皿 5、无菌吸管/移液器 6、样品匀液、稀释液 四、微生物接种 常用的接种方法： 液体接种 四、微生物接种 例： 五、微生物的培养 影响微生物生长的因素： （1）营养物浓度 （2）温度 （3）水分 （4）氧气 （5）pH 微生物的种类不同，培养的方式和条件也不尽相同。 五、微生物的培养 微生物的培养方法： 根据不同的样本及不同的培养目的，可选择不同的培养方法。主要的细菌培养方法有：需氧培养、二氧化碳培养、厌氧培养、微需氧培养. 五、微生物的培养 1、需氧培养 （菌落总数、大肠菌群、大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、商业无菌等） 指需氧菌或兼性厌氧菌在有氧条件下培养。将已接种好的培养基样本在空气中置35℃孵育箱孵育1-2天即可，为保证孵育箱内保持一定的湿度和防止培养基干裂，可在孵育箱内放一杯水或选择有湿度调节的箱体。 品类推荐：电热恒温培养箱、霉菌培养箱、生化培养箱、恒温摇床 五、微生物的培养 2、微需氧培养 （空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等） 微需氧菌培养在大气中及绝对无氧环境中均不能生长，在含有5%-6% 氧气，5%-10%二氧化碳和85%氮气的气体环境中才可生长，将标本接种到培养基上，置于上述气体环境中，35℃进行培养即微需氧培养法。 品类推荐：微需氧系统培养箱 五、微生物的培养 3、二氧化碳培养： 某些细菌（如肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、布鲁氏菌和流感嗜血杆菌等）的培养，特别是在初次分离时，须在5%~10 %二氧化碳环境中培养才能生长。 品类推荐：二氧化碳培养箱 五、微生物的培养 4、厌氧培养 （志贺氏菌、β型副溶血性链球菌、双歧杆菌、乳酸菌等） 厌氧菌需要在无氧的环境中才能生长，通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学的方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。 厌氧培养箱、厌氧罐、厌氧工作站等 六、培养箱分类与应用 设备 控制温度 特点 应用 电热恒温培养箱/隔水式恒温培养箱 RT+5~60℃ 单制式，只能制热，不能制冷，使用温度必须大于室温。 食品、药品微生物实验室，一般实验温度36±1 ℃ 生化培养箱 0~60℃ 双制式，冷热控温 细菌、霉菌、微生物、组织细胞的培养保存以及水质分析与BOD测试等 霉菌培养箱 0~60℃ 双制式，冷热控温，紫外杀