蛋白质工程施以回春妙手将t4溶菌酶的3位异亮氨酸换成半胱氨酸.pptVIP

选修3 现代生物技术专题第三节 蛋白质工程 考考你 学习目标 一.概述蛋白质工程崛起的原因； 二.简述蛋白质工程的基本原理； （目的、实质、流程、前提条件、关键技术） 三.查阅并交流蛋白质工程的应用实例 。 一、蛋白质工程崛起的缘由 第一代胰岛素——动物胰岛素 20世纪80年代以前，用于临床的第一代胰岛素几乎都是从猪、牛的胰脏中提取的，故称为动物胰岛素。 由于动物与人的胰岛素结构有差异，极易激活人体的免疫反应，导致患者出现过敏反应 。 问题：如何获得大量的人胰岛素？ 第二代胰岛素——人胰岛素 20世纪80年代，丹麦的诺和诺德公司率先通过基因工程的方法，将人胰岛素基因导入工程菌，生产出大量高纯度的人胰岛素。 它的结构和人体自身分泌的胰岛素完全一样，不会产生过敏反应。 问题：基因工程有没有创造出自然界中不存在的蛋白质？ 由于胰岛素分子容易聚合成二聚体或多聚体，将其注射到人体后会堆积在皮下，要经过较长时间才能进入血液，因此患者要在饮食前30~60min注射胰岛素。 蛋白质工程应运而生！ 对天然蛋白质进行改造，你认为直接对蛋白质分子进行操作，还是通过对基因的操作来实现？ 天然蛋白质的结构和功能往往无法完全满足人类的需求，需要被改造！ (1)蛋白质结构复杂，对其直接改造操作非常困难。即使改造成功，被改造过的蛋白质分子也无法遗传。 （2）基因编码蛋白质，对基因进行改造后，通过转录和翻译，得到的蛋白质也发生了改变，并且可以遗传下去。 蛋白质工程的实质——改造基因 蛋白质工程——第二代基因工程 如何设计出适合人类需求的新基因（脱氧核苷酸序列）? 功能分析 结构分析 氨基酸序列 脱氧核苷酸序列 （速效型胰岛素） （单体） （B28赖氨酸-B29脯氨酸） （新基因） (天然人胰岛素 ) (二聚体或多聚体 ) （B28脯氨酸-B29赖氨酸） （原有基因） 设计出新基因（目的基因）后，怎么合成目的基因，并在生物体内表达出目的蛋白质? 若将人胰岛素B链的氨基酸排序由B28脯氨酸-B29赖氨酸改为B28赖氨酸-B29脯氨酸，就不会形成二聚体。 基因定点诱变技术的示意图（结合PCR技术） 用一句话概括蛋白质工程的概念 ①前提条件： ②关键技术： ②实质： ③目的： 蛋白质工程（P30）: 是指通过物理化学与生物化学等技术了解蛋白质的结构和功能,并借助计算机设计、基因定点诱变和重组DNA技术改造基因，以定向改造天然蛋白质，甚至创造自然界不存在的蛋白质的技术。 了解蛋白质结构和功能的关系 改造基因（基因修饰或基因合成） 定向改造蛋白质，甚至创造自然界中 不存在的蛋白质 计算机设计、基因定点诱变、重组DNA技术 2005年，诺和诺德公司再次率先利用蛋白质工程的方法将人胰岛素进行改造，得到的第三代胰岛素类似物在中国上市。 与人胰岛素相比，胰岛素类似物在起效时间、作用持续时间上更贴合人体的需要。 第三代胰岛素——胰岛素类似物 第四代胰岛素——口服胰岛素？ 基因工程 蛋白质工程 联系 以基因工程为基础，是延伸出来的第二代基因工程 区 别 蛋白质工程与基因工程有什么区别和联系？ ①基因工程是将一种生物的基因导入另一种生物体内表达，无新基因的产生； 而蛋白质工程则改造基因，产生新基因。 ②基因工程产生自然在已有的蛋白质；蛋白质工程可以创造自然界中不存在的蛋白质。 四、蛋白质工程的应用 应用：提高酶的热稳定性 高温下，酶肽链中的天门冬酰胺和谷氨酰胺易发生脱氨反应，导致酶的结构被破坏，进而酶丧失功能。 途径：将天门冬酰胺和谷氨酰胺转变为其他氨基酸。 实例：酵母菌的丙糖磷酸异构酶上又两个天门冬酰胺，分别转变为苏氨酸和异亮氨酸后，酶的热稳定性提高了将近50%。 生产奶酪时用來杀菌的T４ 溶菌酶, 在工作环境温度６７℃下, ３ 小时后活力仅剩下０.２％, 这样就无法维持正常生产。 蛋白质工程施以回春妙手, 将T４ 溶菌酶的３位异亮氨酸换成半胱氨酸，再跟９７ 位半胱氨酸联接起來。这样，它在６７℃下反应３ 小时后, 活性丝毫未减！ 应用：提高酶的热稳定性（第四组） 鼠抗体 人抗体 恒定区 恒定区 可变区 可变区 嵌合抗体 对人体的不良反应减少 制药领域上 应用：鼠-人嵌合抗体 应用：干扰素的保存（第六组） 天然的干扰素在体外保存相当困难。 如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，那么在—70℃的条件下，可以保存半年。 1 ．关于生物体内存在的天然蛋白质，下列说法不正确的是（ ） A．是生物在长期进化过程中形成的 B．它们的结构和功能符合特定物种生存的需要 C．构成天然蛋白质的氨基酸目前发现的有20种 D．一定完全