M13-08实验八总大肠菌群数的测定 环境工程微生物学教材.ppt

实验八; 一、实验目的*; 二、基本原理; 三、主要内容; （2）初发酵试验 a.水样:原水(10ml、1ml)、10-1 ～ 10-2浓度 b.将试管编号 c.加水样 　　在1支装有5ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨溶液的试管中，加入10ml水样（原水水样）；其余分别加1ml水样（不同浓度），送37℃培养箱培养24h，观察其产酸产气情况，若24h未产酸产气， 可继续培养至48h，记下试验初发酵结果。 ; （4）复发酵试验和结果： 选择具有上述特征的菌落，经涂片、染色和镜检后，若为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则用接种环挑取此菌落的一部分转接至乳糖蛋白胨培养液的试管中，于37℃培养24h后，观察试验结果，若产酸产气即证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群存在的阳性管数查检索表。 如果被测水样（或其他样品）中大肠菌群的量比较多，则水样必须稀释以后才能做，其余步骤与测自来水基本相同。可查相应的检索表得出结果。; 2. 滤膜法（以自来水为例)* (1) 倒培养基：用伊红亚-甲蓝培养基倒培养基，冷却后待用。 (2) 过滤水样：用无菌镊子将灭过菌的滤膜移至过滤器中，然后加333 mL水样至滤器抽气过滤，待水样滤完后再抽气5s即可。 (3) 将滤膜转移至平板：滤膜截留细菌面向上，用无菌镊子将滤膜转移至上述已倒好的平板，使滤膜紧贴培养基表面。 * 因实验时数和设备条件的原因，滤膜法不做。;滤膜法测定总大肠菌群; (4)培养：于37℃培养箱培养22～24h。 (5)观察结果：将具有大肠菌群菌落特征、经革兰氏染色呈阴性、无芽孢的菌体（落）接种到乳糖蛋白胨培养基或乳糖蛋白胨半固体培养基（穿刺接种），经37℃培养箱培养，前者于24h产酸产气者或后者经培养6～8h后产气者，则判定为阳性。 (6)结果计算：将被判为阳性的总菌落数乘以3，即得每升水中的大肠菌群数。; 四、实验材料、器皿