CIK细胞的肿瘤生物医治方法的研究进展.doc

CIK细胞的肿瘤生物治疗方法的研究进展 发布时间：2010-4-15 ? CIK细胞的肿瘤生物治疗方法的研究进展 谢晓冬，李兵，刘兆喆，郑振东 沈阳军区总医院肿瘤科，辽宁 沈阳 110840 【摘要】：肿瘤生物治疗已经成为继手术、放疗和化疗三大经典治疗模式后的第四模式。在肿瘤生物治疗中，细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer cell，CIK）在过继性细胞免疫疗法中扮演者重要角色。CIK是一种新型的免疫活性细胞，将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞，由于该种细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故又被称为NK细胞样T淋巴细胞，CIK细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广及非MHC限制性杀瘤的优点。在基础及临床研究中对CIK的探讨在不断深入，以期获得更有效的肿瘤生物治疗方法，为临床治疗提供依据。本文就CIK细胞的基础和临床研究进展做一简要综述。 【关键词】细胞因子诱导的杀伤细胞；肿瘤生物治疗 ? 近年来，在分子生物学和基因工程技术的飞跃发展的推动下，以免疫治疗为基础发展而来的肿瘤生物治疗日益受到重视，显示出良好的应用前景，成为肿瘤治疗的第四模式。肿瘤生物治疗是指通过肿瘤宿主防御机制或生物制剂的作用以调节机体自身的生物学反应，从而抑制或消除肿瘤生长的治疗方法。肿瘤生物治疗中的过继性细胞免疫疗法(adoptive cell immunotherapy，ACI)是指向肿瘤患者转输具有抗肿瘤活性的免疫细胞(包括特异性的和非特异性)，直接杀伤肿瘤或激发机体免疫反应来杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的。研究适合于该疗法的新型免疫活性细胞是目前国内外的热点并逐渐受到重视，特别是随着介导免疫细胞间相互作用的细胞因子(cytokine，CK)的不断发现和重组成功，使得现代ACI已发展成为主要采用由这些细胞因子激活的免疫细胞进行免疫治疗的方法。淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(CD3AK)、细胞毒性T细胞、 树突状细胞(DC)、基因改造的免疫活性细胞以及CIK细胞等均属于肿瘤生物治疗的免疫活性细胞。 CIK细胞是由美国斯坦福大学的Schmidt－Wolf等[1]于1991年率先发现的，他们将人外周血单核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得了一群异质细胞，该细胞共同表达了CD3和CD56两种膜蛋白分子，是目前所知杀伤活性最强的一种肿瘤生物治疗效应细胞，该细胞兼具T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤等优点，又称为NK样T淋巴细胞（NKT细胞），被认为是新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。CD3＋CD56＋T细胞是CIK群体中主要效应细胞。研究发现CIK细胞对肺癌、肠癌、胃癌、肝癌等多种肿瘤有明显的杀伤效应，同时也有报道CIK细胞可提高肿瘤患者的自身的免疫功能，所以CIK细胞的临床应用研究也倍受人们的关注。 1 CIK细胞的生物学特性 1.1 CIK细胞的制备 Schmidt-wolf 等使用密度离心方法常规分离患者的外周血，制备单个核细胞悬液，调整细胞浓度1×106个/ml进行培养，于培养体系中加入γ-干扰素（IFN-γ）、重组人白介素-2（rhIL-2）、重组人白介素-1（rhIL-1）、抗CD3单克隆抗体等多种细胞因子进行诱导扩增。这样制备出来的CIK细胞在培养的15d，细胞数可增长754倍。在30d的观察期内，细胞增殖高峰时间在第21-28d，细胞数可增长1000倍以上，并与Jiang等[2]报道相符合。 1.2 CIK细胞的增殖力 大部分研究者均通过干扰素γ、rIL-2和抗CD3McAb等细胞因子诱导外周血或脐血中的CIK细胞，经14-21d扩增的CIK细胞其比例可由0.10%-0.13%，上升至19.0%-20.5%，CIK细胞的高增殖活性解决了体外扩增效应细胞所获细胞数目少的难题。 1.3 CIK细胞的表型分析 CIK细胞在肝脏中分布最多，其次为外周血。通过表面标志分析，CIK细胞为CD3、CD56双阳性细胞群，但主要来源于CD3+CD56-的T淋巴细胞，而非CD3-CD56+的NK细胞。CIK细胞的另一个重要来源是CD4-CD8+的T淋巴细胞群。此外，CD4-CD8-的T细胞经过细胞因子诱导培养后，其中56%可同时表达CD3+CD56+，故CIK细胞也可来源于CD4-CD8-的T细胞。这种双阳性T细胞按细胞受体（TCR）的不同，进一步可分为CD3+CD56+ αβT细胞及CD3+CD56+ γδT细胞两个亚群，利用FACS测定CIK表面的CD分子表达情况及其百分率，显示CIK细胞高度表达CD3、CD54、CD11a，中度表达CD3CD56、HLA-DR、CD28