人参皂甙rh- 2c2-you导hl-60细胞增殖及凋亡的影响.pdfVIP

延边大学医学郝内科学专业研究生毕业论文 (11)DAB：北京中杉生物技术有限公司产品 (12)Triton—xlOOSigma公司产品 2．1．3主要仪器 (1)CO。细胞培养箱：USA产品 (2)超净工作台：1080—II型上海净化设各厂 (3)酶联免疫检测仪：．gI--2100C型美国 (4)电热干燥箱：HG--500型国产 (5)离心机：LD5—2A国产 (6)电子天平：围产 (7)倒置显微镜：IX70一$82日本OLYMPUS产品 (8)光学显微镜：日本OL_,VMPUS产品 (9)荧光显微镜：日本OLYMPUS产品 2．2实验方法 2．2．1细胞培养 盛后，实验前24小时换液，全部实验均用进入对数生长期的细胞。 2．2．2实验步骤 2．2．2．!MTT比色法检测细胞增殖抑制率 —— 堡垄奎兰墨兰塑生型堂皇些里壅圭兰些堡苎 150u1二甲基亚觋，振荡至溶解，用酶标仪测吸光度A值(492nm)。据公式 细胞抑制率(％)=1一实验组A值／对照组平均A值 2．2．2．2细胞形态及凋亡检测 2．2．2．2．1实验分组： 对照组、人参皂甙Rh2组、人参皂甙Rh2+三氧化二砷组，培养24h，48h，72h。 2．2．2．2．2制片 度为1X105J／ml，离心涂片于干燥洁净防脱片上，室温干燥。 2．2，2．2．3腿染色 ①离心收获细胞，制成细胞涂片。 ②将经过处理的载玻片用4％多聚甲醛固定一小时后水洗5分钟，苏木素3。I!ljn水洗 及封固。 2．2，2．2．4荧光染色 普通光镜下观察各组细胞形态的变化，取各组离心后细胞分别加入吖啶橙／溴化乙锭 (AO／EB)混合染液，混匀2 min后漓在载玻片上，加盖玻片后在普通光显微镜下计数200个 细胞，在荧光显微镜下计数凋亡细胞，计算凋亡率。 2．2．2。2．5 TL小gL法检测细胞凋亡 ①离心收获细胞，制成细胞涂片。 ②将经过处理的载玻片用4％多聚甲醛在室温下固定30分钟。 ③PRs洗片后，与阻断剂(O．3％H z0。甲醇溶液)室温孵育30分钟。PBS洗片，与通透 液(0，1％Triton。X一100溶于O．1％柠檬酸钠溶液中)在冰浴中孵育2分钟。 7 延边大学医学部内科学专业研究生毕业论文 液(试剂1与试剂2按1：9的比例混合)，在湿盒中37℃孵育1小时，PBS冲洗3次。 PBS冲洗3次。 ④加入lOOu!新配置的DAB底物溶液，室温孵育10分钟，PBS冲洗3次。 ⑦脱水，透明。 ④树胶封片，在光学显微镜下观察。 ⑦结果判断：凋亡细胞阳性物质呈棕黄色，位于细胞核内每张片予在40XlO高倍镜下 Index．AI)；求其平均值。 AI(％)=凋亡细胞数／总细胞数X100％。 2．3数据的统计处理 应用spssll．0统计软件进行多组间方差分析和卡方检验，实验数据以均数±标准差 的形式表示，pO．05时认为有显著差异。 延边大学医学部内科学专业研究生毕业论文 第二章 结 果 MTT比色法检测细胞抑制率 人参皂甙Rh2对HL-60细胞生长抑制率的影响 o．424±o．013o o 0．865±o．OlOo o。825±o，009 o．417．-L0．0071．65#0．760_4-0．0107．85*0．7S9±0．01511．10． 20 0．366±0．01113．68*0．665±0．00719．39*0．575±0．01733．53* 40 0．234±0．00844．81．0．417±0．00549．45*0．326±0．0056231