显微摄影_852409187.ppt

一　实验目的 　了解显微摄影系统的结构和成像原理。能够正确使用显微摄影装置，独立操作将实验中观察到的细胞学现象记录下来。 显微摄影技术 二　显微摄影系统的基本结构 成像系统 显微镜的放大原理 不同色标代表的物镜放大倍数 数值孔径(NA) 放大倍数 (4x 10x 20x 100x) 镜筒长度　160mm 盖玻片厚度　(0.17mm) 油浸标志　HI oil oel 水浸标志　W 显微镜的物镜 在使用大数值孔径（N.A.≥0.75）的物镜时，从盖玻片上表面到标本面的距离最好为0.17毫米。然而，由于标本、封入剂和盖玻片等的厚度参差不齐；所以要保持0.17毫米的距离是一件很难的工作。 玻片厚度校正环 显微镜的重要参数 数值孔径(N.A.)=n sin(?) n为介质折射率　?=?/2，?为开口角，即物镜前面的发光点进入物镜的角度。 分辨力　是指能把两个物点分开的最小距离的能力，分辨距离越小其分辨力就越高。公式表达为： d=0.61×(λ/N.A.) (λ：为使用光线的波长 N.A.：为物镜的数值孔径) 放大倍数与分辨率 M=Mo×Me（×Mi） M：总放大倍数； Mo：物镜放大倍数； Me：目镜放大倍数； Mi：中间放大倍数。 放大率或称放大倍数： 总的放大倍数等于物镜和目镜放大倍数的乘积。 一般有效放大倍数： 上限是：物镜数值孔径x1000；下限是：物镜数值孔径x250 成像装置 实验常用成像系统 NIKON　E-400　 显微镜系统 DS-L2成像系统 文件设置 文件名：名称到秒！！ 图像尺寸：设成JPG 2560*1920 拍摄 三　显微摄影步骤 以制备好的细胞学标本为材料（果蝇唾腺、Barr 小体、人类染色体等） 1.显微摄影装置的调试 （1）聚光器调中　 （2）光源灯丝调中 （3）聚光器孔径的调节　 　以物镜上的数值孔径乘以0.7求得孔径光圈的大小，将孔径光圈的数值调至所需位置。（分辨率下降3成，亮度减半，但对比度提高，在高倍条件下景深也加深。 2.　调节好标本的位置，用低倍镜找到欲拍摄的视野后转高倍镜观察。 3.打开成像系统，从成像系统中观察所需的目标，并调节细螺旋置图像清晰。 4.做好文件名命名。 5.锁定视野，点击曝光。 6.牢记文件名！（助教将会把照片上传到FTP） 7.照相结束后，将标本取下；关闭照相机电源，显微镜复原。 四 显微镜的保养 光源故障现象 灯光不亮，或亮度不变化始终处于最亮度和最暗状态。 故障分析 一是光路接触不良；二是灯泡击坏； 三是二极管击穿。 根据以上情况进行顺序检查，系统解决问题。