hpve6e7基因转染人树突状细胞抗食管癌体内外研究-study on hp ve6 e7 gene transfection of human dendritic cells against esophageal cancer in vivo and in vitro.docx

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2018-05-29 发布于上海
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hpve6e7基因转染人树突状细胞抗食管癌体内外研究-study on hp ve6 e7 gene transfection of human dendritic cells against esophageal cancer in vivo and in vitro.docx

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hpve6e7基因转染人树突状细胞抗食管癌体内外研究-study on hp ve6 e7 gene transfection of human dendritic cells against esophageal cancer in vivo and in vitro

4.致瘤性研究显示腹腔注射HPV16E6/18E7-DC疫苗的小鼠均未发生肿瘤。5.在免疫保护组，Im-16D和Im-18D组肿瘤的生长速度减慢，肿瘤潜伏期较C组和Im-T组明显延长（P＜0.01），肿瘤体积和肿瘤重量均明显小于C组和Im-T组（P＜0.01），Im-16D和Im-18D组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；在免疫治疗组，Tr-16D和Tr-18D肿瘤体积和肿瘤重量均明显小于C组和Tr-T组（P＜0.01），Tr-16D和Tr-18D比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：1.以免疫磁珠法从人脐带血中分离CD34＋干细胞，在体外经rhGM-CSF和rhTNF-α联合诱导14天，可分化扩增出大量高纯度、形态功能成熟的DC，此方法操作简便，分离细胞量大、纯度高，具有巨大的实用价值。2.使用阳离子脂质体将HPV-E6E7基因转入DC，细胞生长良好，并且目的基因在DC内高表达，说明DC疫苗构建成功，阳离子脂质体可以安全、有效的介导基因转入DC，为DC疫苗的构建做了有益探索。3.HPV18E7-DC疫苗在体外能诱导出高效的特异性CTL，对表达HPV18的食管癌EC-109细胞产生强大的特异性杀伤效应。4.HPV16E6/18E7-DC疫苗无体内致瘤性，安全可靠。5.HPV16E6/18E7-DC疫苗能显著抵抗EC-109细胞对小鼠的攻击，并能显著抑制荷瘤小鼠体内肿瘤的生长，具有高效而显著的免疫保护和免疫治疗效应。关键词树突状细胞；食管癌；HPV；基因转染；SCID鼠。Anti-esophagealcarcinomaimmunologicaleffectinducedbydendriticcelltransfectedwithHPV-E6E7genePostgraduate：WuLinTeacher：Pro.ChenShenRenAbstractObjective:Toindusetheproliferationanddifferentiationofdendriticcell(DC)derivedfromhumancordbloodCD34＋progenitorcells，transfecteditwithHPV16E6/18E7genetopreparetheDCvaccine，detectitsbiologicalcharacteristics，observetheanti-esophagealcarcinomaimmunologicaleffectofcytotoxicTlymphocytes(CTL)activatedbyHPV16E6/18E7-DCvaccineinvitro，andalsostudytheimmunopreventiveandimmunotherapeuticeffectsofHPV16E6/18E7-DCvaccineonhumanesophagealcarcinomacellsEC-109inSCIDmice，whoseimmunologicsystemhavebeenreconstituted.Methods:1.ToextractthepcDNA3.1-HPV16E6/18E7plasmidbyQiagenPlasmidMiniKid,detectitsdensityandpuritybymeansofspectrophotometer,transfectitintoDCderivedfromhumancordbloodCD34＋progenitorcellswhichhavebeeninducedbyrecombinedhumangranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor(rhGM-CSF)andrecombinedhumantumornecrosisfactor(rhTNF)-αfor12days,afteranother48hour’sculture，thematureHPV16E6/18E7-DCvaccinewasharvested.Thechangeincellmorphologywasobservedunderphasecontrastmicroscope,theexpressionofE6/E7proteininHPV16E6/18E7-DCvaccinewasanalyzedbyflowcytometry.Inaddition,DCphenotypesCD80、CD86andCD83pro-andpost-transfectionweredeterminedaswell.2.ThedotblothybridizationtechniquewasappliedtoanalyzetheHPVtypeofesopha