hsp70cd80嵌合dna疫苗通过调节趋化因子及受体对哮喘小鼠气道炎症干预作用及机制的研究-study on the intervention effect and mechanism of hsp 70 cd 80 chimeric dna vaccine on airway inflammation in asthmatic mice by regulating chemokines and receptors.docx

HSP70/CD80嵌合质粒，对照组与哮喘组注射相同剂量的生理盐水。眼球采血用ELISA方法检测外周血中IgE的含量。光镜下观察小鼠肺 组织病理变化。免疫组织化学TARC抗原，定位其来源和在气道中的 表达情况。Real-Time PCR检测肺组织IL-4和CCR4基因的表达水平。 结果：1．小鼠气道反应性：予以不同浓度AchE刺激后，与对照组相 比，哮喘组和载体组小鼠的气道反应性明显增高，而疫苗组有所降低。 在AchE浓度达24mg/ml后，哮喘组、载体组小鼠显著高于对照组 (P0.050)，而疫苗组小鼠低于哮喘组开始有明显差异，差异有统计 学意义(P0.050)。2．肺组织病理学改变：在小鼠肺 HE 染色的病理切片中，哮喘组和 载体组其支气管和血管周围甚至肺泡有明显的炎细胞浸润，支气管上 皮有断裂、坏死，差异有统计学意义(P0.050)；而疫苗组能有效抑 制气道和血管周围的炎症反应,差异有统计学意义(P0.050)；在小鼠 肺切片 PAS 染色中，哮喘组和载体组气道上皮中杯状细胞增生肥大， PAS 着色细胞明显增加，管腔中有大量黏液形成，3．血清中 IgE 浓度变化：与对照组比较，哮喘组和载体组小鼠血清 中 IgE 含量明显升高(P0.050) ；与哮喘组相比，疫苗组血清中 IgE 含量降低，差异具有统计学意义(P0.050)。 4．免疫组化检测肺组织 TARC 蛋白表达情况：免疫组化显示 TARC 蛋白主要表达于支气管上皮细胞，哮喘组和载体组 TARC 表达明显 增多呈阳性或强阳性(P0.050)，与哮喘组比较，疫苗组 TARC 表达 呈阴性或弱阳性，差异学有统计意义(P0.050)。5．Real-Time PCR 法检测肺组织 IL-4、CCR4 的基因表达水平：与对照组比较，哮喘组和载体组 IL-4、CCR4 的基因表达增加(P0.050)； 与哮喘组相比，6．相关性分析：小鼠免疫组化半定量 TARC 与肺组织炎细胞呈正相 关(r=0.661，P＜0.010)；小鼠免疫组化半定量 TARC 与肺组织 IL-4 呈正相关(r= 0.573，P＜0.050)；小鼠免疫组化半定量 TARC 与肺组 织 CCR4 呈正相关：(r=0.706，P＜0.050)；小鼠肺组织 IL-4 与 CCR4 相呈正相关：(r=0.536，P＜0.050）。结论：1,为该质粒在动物体内的免疫学效应进一步研究奠定了基 础。2．HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可减轻气道炎症反应，减少黏液 分泌，降低气道阻力。3．本研究结果显示HSP70/CD80嵌合DNA疫 苗可通过抑制TARC在上皮细胞的表达，从而打断了IL-4，TARC正 反馈效应，减弱Th2反应，为该疫苗作为新型免疫调节性疫苗提供新 的理论依据。关键词：哮喘；气道炎症；DNA 疫苗；CCR4；TRACThe Influence of HSP70/CD80 DNA Vaccine on Airway Inflammation and mechanism of intervention byRegulating the Chemokine and the Receptor of Chemokine in Asthmatic MiceAbstractObjective:Bronchial asthma (asthma) is a complex chronic inflammatory airway diseases, which of the main pathological feature are severe airway inflammation, AHR and airway remodeling, involving a variety of inflammatory mediators and immune cells to the role of airway.T lymphocytes are divided into Th1 and Th2 by produced cytokines type of the T helper cell (Th ) cells ,and the Th1/Th2 imbalance is the most important pathogenesis of asthma .In addition to CD4 + T cells, there are other cells involved in the inflammatory process of asthma, including eosinophils, basophils, lymphocytes, neutrophils, mast cells,