il6stat3信号通路与肝硬变大鼠肝部分切除后肝再生的实验分析-experimental analysis of il 6 stat 3 signaling pathway and liver regeneration after partial hepatectomy in liver cirrhosis rats.docxVIP

IL-6/STAT3信号通路与肝硬变大鼠肝部分切除后肝再生的实验研究中文摘要目的建立肝硬化大鼠肝部份切除模型，了解肝硬化大鼠与正常大鼠肝切除后肝再生过程的差异，探讨IL-6/STAT3信号通路在肝硬变大鼠肝部分切除后肝再生障碍中的作用。方法皮下注射50％四氯化碳橄榄油溶液＋10％乙醇喂养的复合方法建立SPF级SD大鼠肝硬化模型，剂量为0.3ml/100g，时间为9周。正常大鼠为对照组。对照组及肝硬化组大鼠均切除肝脏中叶及左叶（约70％），分别于术后0h、1h、2h、4h、12h、24h、48h及72h八个不同的时相点处死动物模型，收集并保存残肝组织及血液标本，离心血液收集血清后-80℃保存，肝组织一部分-80℃保存备用，另一部分福尔马林固定后48小时内行石蜡包埋。全自动生化分析仪测定大鼠血清ALT、AST、ALB以了解大鼠肝功能变化，Elisa法检测血清IL-6及血清TNF-α浓度，免疫组化二步法检测残肝组织切片PCNA阳性细胞数及活性STAT3蛋白阳性细胞数，常规病理切片光镜观察肝组织病理改变、有丝分裂细胞数。采用SPSS17.0和excel2003进行统计分析及做图，数据采用均数士标准差(x土s)方式记录，组间差别比较采用t检验，P0.05为有统计学意义。I结果1、在模型制作过程中，对照组及实验组共有5只死亡，其中实验组死亡2只，造模成功率分别为94.1％及93.0％，光学显微镜下HE染色可见肝硬化大鼠正常肝小叶结构被破坏，纤维组织广泛增生，形成假小叶，假小叶内肝细胞索排列紊乱，可见小叶中央静脉缺如、偏位、或有2个以上；对照组大鼠肝组织正常，肝小叶形态结构规则；2、各时间段实验组大鼠血清ALT、AST含量基本均高于对照组，而实验组大鼠血清ALB均低于对照组，但伴随肝再生过程的进展，肝功能均能逐渐恢复；3、肝大部切除术后1-2d是肝脏增值最活跃阶段，PCNA标记细胞数及有丝分裂细胞数均于切除后12小时开始迅速升高，并于切除后48小时达峰值，然后逐渐下降，肝硬化组有丝分裂细胞数也于术后12小时开始升高，但术后24小时已达高峰并下降，肝硬化组PCNA标记细胞数在12小时前均高于对照组，于切除后48小时达高峰后下降，其峰值远低于对照组；4、肝切除后，对照组血清IL-6水平在术后1h达高峰，后缓慢下降；而实验组则到术后12小时才缓慢到达高峰，之前均低于对照组，72h出现第二次高峰；肝切除后活性STAT3蛋白于2h达高峰后迅速下降至极低水平，但实验组2hSTAT3阳性细胞数明显低于对照组。结论1、肝部份切除后肝硬化组肝细胞再生能力远低于对照组，肝硬化大鼠肝再生受抑制；2、肝硬化大鼠部分肝切除术后肝再生障碍与其早期IL-6水平低下而导致STAT3蛋白活化不足有关。关键词肝硬化；肝再生；白细胞介素6；STAT3EXPERIMENTALSTUDYONIL-6/STAT3SIGNALINGPATHWAYINLIVERREGENERATIONOFRATWITHCIRRHOSISFOLLOWINGPARTIALHEPATECTOMYABSTRACTObjectiveToevaluatetheeffectofIL-6/STAT3signalingpathwayintheimpairedliverregenerationofcirrhoticratsafterhepatectomy.MethodsCirrhosiswasinducedinratsbyadministrationofCCL4.Untreatedratswereusedascontrols.Thecontrolratsaswellasthecirrhoticratsweresubjectedto70%partialhepatectomy.At0h/1h/2h/4h/12h/24h/48hand72hafterhepatectomy,theliversandbloodwerecollected,thelevelsofALT/AST/ALB/IL-6/TNF-ainserum,theexpressionofPCNAandactiveSTAT3proteinsinliverremnantswereanalyzed.Results24hafterhepatectomy,wedetectedsignificantlylowermitoticindexandPCNApositivecellsinthecirrhoticratascomparedtothecontrols.ThecirrhoticratexpressedsignificantlylowerlevelsofIL-6ascomparedtothecontrolsupto12hposthepatectomy.Significantlylow