il6 il8与羊水栓塞关系的实验研究-experimental study on the relationship between il6 il8 and amniotic fluid embolism.docx

遵义医学院硕士学位论文吴 遵义医学院硕士学位论文 吴 琦 万方数据 万方数据 中英文缩略词表 缩略词 AFE 英文全称 Amniotic Fluid Embolism 中文全称 羊水栓塞 IL-6 IL-8 IHC Interleukin-6 Interleukin-8 Immunohistochemistry 白介素-6 白介素-8 免疫组织化学染色 ELISA Enzyme-linked immunoadsordent assay 酶联免疫吸附试验 FDP Fibrin degradation products 纤维蛋白降解产物 HPPR Pulmonary pressor response 肺动脉增压反应 FIB Fibrinogen 纤维蛋白原 MODS Multiple organ dysfunction syndrome 多器官功能障碍综合征 LT Leukotrienes 白三烯 PG Prostaglandin 前列腺素 ET Endothelin 内皮素 MCT Mast cell tryptase 肥大细胞类胰蛋白酶 DIC Disseminated intravascular coagulation 弥漫性血管内凝血 TXB2 PAF Thromboxane B2 Platelet-activating factor 血栓烷 B2 血小板活化因子 PLA2 APM Phospholipase A2 Alcian blue-Phloxine-Martius yellow 磷脂酶 A2 阿尔新蓝-荧光桃红-马休黄 1 IL-6、IL-8 与羊水栓塞关系 的实验研究 中文摘要 目的：通过建立羊水栓塞动物模型，分析外周血液动力学改变、测定血中 IL-6、IL-8 含量的变化，进一步探索羊水栓塞的发病机制。 方法：1．构建羊水栓塞的大鼠模型 正常怀孕大鼠30只，重300g~500g，胎龄20~25d。随机分为3组：对照组（生理 盐水组）、实验组1（羊水原液组）、实验组2（羊水胎粪液组），每组为10只。待麻醉 生效后，大鼠行子宫次全切除术后，关腹。分离孕鼠左颈总动脉，从左颈总动脉插管， 并将其接通三通管连接于二通道生理记录仪上，测出连续的血液动力学指标。三组经 腹腔静脉分别注入生理盐水、羊水原液、羊水胎粪混合离心上清液，分别于注射前、 注射后60min 由左颈总动脉取血，量1ml（若在观察过程中大鼠出现死亡立即取血）， 将血液离心10min（3000r/min），取其上清液放置于-20°C 恒温冰箱中保存备用，剪开 胸腔，取孕鼠右肺组织留做病理学检查。 2．羊水胎粪上清液的制备 打开胎鼠腹壁，取出胎鼠大肠，用注射器抽取羊水冲洗胎鼠肠腔（或将胎粪轻轻 挤压出来），用匀浆器磨碎，配置成羊水中混有 1%~7%胎粪的羊水胎粪混合悬液，然 后离心 10min （3000r/min），留取上清液。 IL-6 的检测方法 IL-6 的检测方法：用酶联免疫吸附实验（ELISA）对 IL-6 进行检测。将已知 IL-6 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 IL-6 和生物素标 记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的 HRP。再经过温育和洗涤，去除 未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B，和酶结合物同时作用，产生颜色。颜色的 深浅和样品中 IL-6 的浓度呈比例关系。 IL-8 的检测方法 IL-8 的检测方法：用酶联免疫吸附实验（ELISA）对 IL-8 进行检。将已知 IL-8 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 IL-8 和生物素标 记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的 HRP。再经过温育和洗涤，去除 2 未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的 深浅和样品中 IL-8 的浓度呈比例关系。 所有数据使用 SPSS18.0 处理，组内采用 t 检验，组间比较用多个样本均数间的 两两比较。P0.05 有统计学意义。 结果： 1. 大鼠羊水栓塞模型建立成功，实验组 1、实验组 2 孕鼠临床表现比较严重，实 验组 1 孕鼠 60min 内无死亡，实验组 2 孕鼠 60min 内 1 只死亡。 三组孕鼠外周血液 动力学结果：对照组血液动力学指标有一过性改变，无统计学意义（P0.05），实验 组 1、实验组 2 与对照组动脉收缩压、舒张压及平均动脉压相比有明显下降（P0.05）， 以注入羊水后 10min 最为明显，30min 至 60min 维持低水平，未恢复正常，实验组 2 中有一只孕鼠出现平均动脉血压持续性下降约至 20mmHg 发展成心衰，实验组 1 与实 验组 2 之间差异不明显，无统计学意义（P0.05），三组孕鼠心率改变差异无统计