il10对脑缺血大鼠内源性干细胞增殖及分化的影响-effects of il10 on proliferation and differentiation of endogenous stem cells in rats with cerebral ischemia.docx

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2018-05-29 发布于上海
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il10对脑缺血大鼠内源性干细胞增殖及分化的影响-effects of il10 on proliferation and differentiation of endogenous stem cells in rats with cerebral ischemia

目录中英文对照表…………………………………...……………………….1中文摘要…………………………………………………………………2英文摘要…………………………………………………………………4前言…………………………………...…………….……………………6材料和方法1实验材料…………………………...…………….…………………...…92实验方法2.1实验动物分组………………………………….……………112.2慢病毒载体构建和包装……………..……………….…...…122.3大鼠局灶性脑缺血模型的制备……………….….…………….122.4侧脑室注射IL-10过表达慢病毒载体…………..………….…142.5神经功能评分……………………………….….……………….152.6TTC染色及脑梗死体积的测定………………..….…...……….162.7酶联免疫吸附试验检测IL-10水平…………..…………….173Elisa法检测大鼠脑内IL-10表达量……….……………...274Westernblot检测Nestin、DCX蛋白表达….…….……..…...……27讨论…………………………………...…………………….………..29全文结论………………………………...…………………….….……32参考文献………………………………...………………….….….……33综述………………………………...………………….….….……..….…39致谢……………………………………………………………….……46中英文对照表（Abbreviation）英文缩写英文全称中文全称IL-10Interleukin-10白细胞介素-10SDSpragueDawley斯泼累格·多雷RNAiRNAinterferenceRNA干扰MCAOMiddlecerebralarteryocclusion大脑中动脉闭塞NDSTheneurologicaldeficitscores神经功能缺失评分mNSSModifiedneurologicalseverityscores改良神经功能缺损评分TTC2,3,5-triphenyltetrazoliumChloride2，3，5-三苯基氯化四氮唑DCXDoublecortin神经元前体细胞的微管相关蛋白INF-γInterferon-γ干扰素–γTNF-аIL-1βTumornecrosisfactor-αInterleukin-1β肿瘤坏死因子-а白介素-1βIL-6Interleukin-6白介素-6MACMinimalalveolarconcentration最低有效肺泡浓度CCACommoncarotidartery颈总动脉ECAInternalcarotidartery颈外动脉ICAExternalcarotidartery颈内动脉MCAMiddlecerebralartery大脑中动脉ACAAnteriorcerebralartery大脑前动脉BCABicinchoninicacid2,2-联喹啉-4,4-二甲钠PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟SDSSodiumdodecylsulfatesodiumsaltN,N,N,N-四甲基乙二胺APSAmmoniumpersulphate过硫酸铵TEMEDTetramethylethylenediamine十二烷基硫酸钠PMSFPolyvinylideneFluoride聚偏二氟乙烯ECLElectrochemiluminescence化学发光剂NSCNeuralstemcells神经干细胞IL-10对脑缺血大鼠内源性干细胞增殖及分化的影响中文摘要【目的】IL-10在脑缺血后的神经保护作用已普遍被国内外学者接受。本研究采用建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型后1小时对SD大鼠侧脑室注射重组IL-10过表达慢病毒载体（促进1L-10表达）和重组IL-10-RNAi慢病毒载体（抑制IL-10表达），观察大鼠神经损伤情况，检测伤侧脑组织中IL-10水平以及脑组织中Nestin、DCX表达情况，探讨IL-10对脑缺血大鼠神经再生机制。【方法】1、重组IL-10过表达慢病毒载体以及重组IL-10-RNAi慢病毒载体的构建和包装。2、采用线栓法建立大鼠MCAO脑缺血模型。重组IL-10过表达慢病毒载体（促进1L-10表达）和重组IL-10-RNAi慢病毒载体（抑制IL-10表达）用PBS溶解后于造模后1小时经侧脑室注射进行干预。采用ELISA检测IL-10表达情况，判断慢病毒转染是否成功。3、采用Longa5分制NDS法、修正的神经行为学评分（mNSS）和改良贴纸去除试验评价各组大鼠神经功能变化。TTC染色并计算脑梗死体积判断脑缺