il10对稳定转染hbvx基因的hl7702细胞炎症相关因子的影响-effects of il10 on inflammatory cytokines in hl 7702 cells stably transfected with hbvx gene.docx

目录英文略缩词表……………………………………………………第1页中文摘要………………………………………………………第2页英文摘要………………………………………………………第3页前言……………………………………………………………第5页主要材料与仪器…………………………………………………第7页方法………………………………………………………………第9页结果……………………………………………………………第14页讨论……………………………………………………………第25页结论……………………………………………………………第28页参考文献………………………………………………………第29页致谢……………………………………………………………第31页综述……………………………………………………………第32页英文略缩词表COX-2cyclooxygenase-2环氧化酶-2PGE2prostaglandinE2前列腺素E2IL-6interleukin-6白介素-6IL-10interleukin-10白介素-10TNF-αtumournecrosisfactor-α肿瘤坏死因子-αSTST3signaltransducersandactivatorsoftranscription转录激活因子3HSChepaticstellatecells肝星状细胞KCkuppfercell枯否氏细胞BSAalbuminfrombovineserum牛血清白蛋白PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液IODintegralopticaldensity积分光密度值IFN-γinterferon-γ干扰素-γNF-ΚBnucleartranscriptionfactorkappaB核转录因子kappaB1IL-10对稳定转染HBVX基因的HL-7702细胞炎症相关因子的影响中文摘要【目的】乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染是引起病毒性肝炎的主要病原体之一，其中X基因编码的X蛋白具有多种生物学功能，可与宿主细胞的多种蛋白相互作用，调控宿主细胞基因表达，进而影响宿主细胞的信号转导、增殖与分化等。HBV感染可激活多种信号通路并影响炎症相关基因的表达，如IL-6、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)和PGE2等。本研究拟探讨炎症相关因子在稳定转染HBVX基因的肝细胞中的表达情况，观察IL-10对肝细胞炎症相关因子表达的影响，为进一步阐明乙肝病毒X蛋白在HBV致病过程中的作用机制提供一些实验依据。【方法】应用免疫细胞化学S-P法检测HL-7702、HL-7702空载、HL-7702X三种细胞中COX-2蛋白的表达情况；以不同浓度的白介素10（IL-10）(0、40、60、80ng/ml)处理体外培养的肝细胞，了解在不同时间内(24、48h)各组细胞中COX-2蛋白的表达情况。采用半定量RT-PCR方法检测各组细胞中COX-2mRNA的表达。体外培养肝细胞，以不同浓度IL-10(0、40、60、80ng/ml)处理后收集细胞上清液，采用ELISA法检测上清液中IL-6、TNF-α、PGE2的含量。【结果】稳定转染HBx基因的HL-7702细胞中COX-2蛋白和mRNA的表达较对照组及空载组明显升高（P0.05;P0.05），不同时间段变化无明显差异（P0.05）。在加入40、60、80ng/ml的IL-10处理24h及48h后，COX-2蛋白及mRNA的表达均明显下调，且各组间比较均有统计学意义（P0.05）。细胞上清中均有IL-6、TNF-α、PGE2的表达，但稳定转染HBx基因的HL-7702细胞中因子的表达无明显差异（P0.05），加入IL-10干预后各组炎症因子的表达无明显改变。【结论】稳定转染HBx基因的肝细胞COX-2的表达均明显上调。外源性的IL-10可以抑制肝细胞中COX-2蛋白和mRNA的表达，从而减少肝细胞炎症反应，但细胞上清中IL-6、TNF-α、PGE2的表达未见明显异常，IL-10的影响不明显。【关键词】乙肝病毒X蛋白,乙肝病毒X基因,白介素-10,炎症反应,COX-22EffectofIL-10onstablytransfectionwithHBVXgeneinHL-7702ofinflammation-relatedfactorsAbstractAIMHepatitisBvirusinfection(hepatitisBvirus,HBV)isoneofthemajorpathogensofviralhepatitis.XgeneencodingXproteinhavingavarietyofbiologicalfunctions，includinginteractwithmany