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蛋白相互作用-hermoFisher
ThThermo SSciientifitific PiPierce
蛋蛋白相互作用的研究方法和实实践
罗罗 莎莎
Rosa Luo Ph.D.
Application Scientist
Biosciences Division
Thermo Fisher Scientific China
酵母蛋白质相互作用图谱
Thick blue lines represent literature-derived interactions from PreBIND+MIPS in the
HMS-PCI dataset.
Thin orange lines represent potential novel interactions. Courtesy MDS Proteomics
2
蛋白质相互作用技术
Genetic Chemical
Two Hybrid Crosslinking
Phage Display Label-transfer
MMuttatitionall anallysiis FFeBABEBABE mappiing
BiochemicalBiochemical FluorescentFluorescent
Immunoprecipitation (IP) Immunofluorescence
colocalization
CCo-IImmunopreciipititatition (C(Co-IP)IP)
FRET (Fluorescence Resonance
Pull-Down Assays Energy Transfer)
Far Western
3
蛋白相互作用研究方法
• 免疫沉淀(IP)
•• 富集富集、纯化纯化、检测兴趣蛋白检测兴趣蛋白
• 用抗体捕获抗原 Prey
• 免疫共沉淀(Co-IP)
• 富集、纯化、检测兴趣蛋白
Bait
•• 用抗体捕获抗原和互作蛋白用抗体捕获抗原和互作蛋白 PreyPrey
• Pull-Down
• 确定蛋白之间的互作 Bait Prey
• 用标签蛋白捕获结合蛋白
4
传统的免疫沉淀(IP)
+
Stepp 1. Immobilize antibodyy Stepp 2. Add sampple
Step 4. Elute antibody:protein Step 3. Bind protein and
complex wash away unbound protein
+
琼脂
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