高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量.docx

实验室应用案例高效液相色谱仪测定黄芪中的黄芪甲苷含量2018年3月版权所有? sainaer Corporation保留所有权利1摘要本文建立了一种根据《中国药典》2015版要求，测定中药饮片黄芪中黄芪甲苷苷含量的高效液相色谱方法，按中国药典条件，适当调整柱温，苦杏仁苷保留时间RSD%在0.17%，峰面积RSD%为1.64%。关键词：中药饮片 黄芪黄芪甲苷 E800型蒸发光散射检测器 高效液相色谱黄芪甲苷是一种从黄芪上提取出来的高纯度药物，有“超级黄芪多糖”之称。黄芪甲苷能增强机体免疫力、提高机体的抗病能力。黄芪多糖中的主要有效成份是多糖和黄芪苷。黄芪苷分为黄芪苷Ⅰ、黄芪苷Ⅱ、黄芪苷Ⅳ。其中生物活性最好的是黄芪苷IV即黄芪甲苷。黄芪甲苷不仅具有黄芪多糖的作用，还有些是黄芪多糖无法比拟的作用，其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍。由于含量少，效果好，更是有“超级黄芪多糖”之称。图1 黄芪甲苷结构式2检测部分2.1仪器本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台E800蒸发光散射检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器；sainaer色谱工作站。2.2分析条件色谱柱：岛津WondaSil C18 Superb 5um流动相：乙腈：水=32:68（V/V）流速：1ml/min柱温：35℃气体流量：2.8L/min蒸发温度：75℃进样量：10μL等度洗脱2.3标准品溶液的配制和样品处理标准品品溶液的制备 ?取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。样品溶液的制备 ?取干燥的黄芪切片，粉碎后，取中粉约4g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即制得黄芪样品溶液。3结果3.1标样的色谱图图2 0.5mg/ml标准品色谱图3.2线性关系将配制浓度为0.5mg/ml的标准溶液，分别精密吸取对照品溶液2.5μL、5μL、10μL、15μL、20μL，供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积对数为横坐标，已进样量对数为纵坐标绘制工作曲线，所得曲线良好，R达到0.999以上。标准品的浓度及峰面积的结果见表1。级别进样体积（μL）峰面积12605225505213102247854156875125201410518图3 黄芪甲苷的标准曲线 表1 黄芪甲苷进样量及峰面积3.3精密度试验50mg/ml的苦杏仁苷标准品连续测定6次，考察方法的精密度，保留时间和峰面积的RSD%结果如表2所示：序号保留峰面积111.591142152211.542145212311.458144879411.523148721511.542148524611.554144258平均11.535145624RSD%0.3811.750表2 黄芪甲苷重复性数据（n=6）3.4样品测试使用2.3配制好的黄芪甲苷样品溶液得出图4图谱：图4 黄芪样品图谱组份名保留时间（min）面积浓度（mg/ml）黄芪甲苷10.10823263430.106表3 黄芪中黄芪甲苷测定结果4结论经方法有效性测试，本方法的工作曲线好R=0.999以上。数据重现性好，保留时间RSD%=0.38%（n=6），小于国家要求0.5%以内，峰面积RSD%=1.75%（n=6），小于国家要求2.0%以内。并且峰形完好，拖尾因子为1.02。说明此方法适用于检测黄芪中黄芪甲苷的含量。5客户现场照片