分子生物学-12-1-芯片及其他技术知识.pptVIP

反应完毕后0.5小时内，将芯片放入芯片阅读系统进行阅读分析。 基因芯片数据分析 不讲 6.5 利用酵母鉴定靶基因功能 不讲 6.6.1 凝胶滞缓实验 electrophoretic mobility shift assay,EMSA 又叫作DNA迁移率变动试验 （DNA mobility shift assay） 又叫做凝胶阻滞实验（Gel retardation assay）是用于体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。 1.凝胶滞缓实验 用于在体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。 分离纯化特定DNA结合蛋白的一种典型的实验方法。 凝胶阻滞实验原理 在凝胶电泳中，由于电场的作用，裸露的DNA 朝正电极移动的距离与其分子量的对数成反比。如果此时DNA分子与某种蛋白质相结合，由于分子量增大，它在凝胶中的迁移作用便会受到阻滞，在特定电压和时间内朝正电极移动的距离也就相应缩短了。 DNA与蛋白的结合导致了电泳迁移率的降低 凝胶阻滞实验的基本原理图 放射性标记的DNA由于同一种细胞蛋白质B结合，于是在凝胶电泳中移动速度变慢，在放射自显影中呈现滞后的条带 A C B 放射自显影 * * * * 凝胶电泳 放射性标记的DNA 细胞蛋白质提取物 蛋白质与DNA结合 * * * * * * DNA-蛋白质结合物电泳迁移缓慢 滞后带：表明DNA与蛋白质结合 B B 凝胶阻滞实验不仅可以用来鉴定在特殊类型细胞的提取物中，是否存在与某一特定DNA片断结合的蛋白质分子 而且可以较为精确地研究DNA序列的特异性。（加入超量的非标记竞争DNA） 这里？ 特异性结合？ 不讲 在凝胶阻滞实验中竞争DNA与探针DNA之间的竞争作用，可以同时鉴定不同的DNA与不同的蛋白质之间的相互作用； 或者鉴定同一个DNA更容易与那种蛋白质结合 不讲 6.4 芯片等其它分子生物学技术 山西师范大学 生命科学学院 生物芯片 生物芯片是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术，主要是指利用机器人进行操作，通过缩微技术、微加工技术、光引导化学合成技术和微电子技术等，自动在硅片、玻璃片、凝胶或尼龙膜等物质制造的固体芯片表面上，将成千上万的具有生物活性的大分子（DNA等）制作成微阵列。 杂交技术 6.4.1生物芯片的一般类型 1. 按照芯片基质上固定的生物材料的不同，可以将生物芯片划分为DNA或基因芯片、蛋白质芯片、RNA芯片、细胞芯片、组织芯片、芯片实验室(Lab on chip)。 如果芯片上固定的是肽或蛋白，则称为肽芯片或蛋白芯片； 如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或DNA，就是DNA芯片。 杂交技术 生物芯片 阵列型 仪器型 化 合 物 药 物 核 酸 多 肽 蛋 白 质 受 体 细 胞 细 胞 器 病 毒 微 小 组 织 样 品 筛 选 浓 缩 放 大 毛 细 管 电 泳 电 介 质 电 泳 色 谱 质 谱 微 型 光 谱 仪 芯 片 实 验 室 “芯片实验室”通过微细加工工艺制作的微滤器、微反应器、微泵、微阀门、微电极等以实现对生物样品从制备、生化反应到检测和分析的全过程，从而极大地缩短的检测和分析时间，节省了实验材料，相当于一个具有各种功能的芯片的集合体。 杂交技术 Lab on a chip 4. 根据原理还有元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。 杂交技术 5. 另外一种分法即： 将待测（靶）未知序列DNA固定于支持物上，适合于大量不同靶DNA进行用以探针分析的；【靶片】 将大量已知序列分子固定于支持物上作为探针分析其他序列。【探片】（多，拟南芥基因组芯片，水稻基因组芯片） 杂交技术 基因芯片的分类 基因芯片就是脱氧核糖核酸的微点阵，在极小的芯片上，成一定规则地排列着大量已知碱基序列的DNA片段。 将大量探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。 根据碱基互补配对原则，确定。 这里有一点需要说明的是由于基因芯片（Genechip）这一专有名词已经被业界的这个龙头老大Affymetrix公司注册专利，因而其他厂家的同类产品通常称为DNA微阵列（DNA Microarray）。 基因芯片 转向介绍 基因芯片技术的主要特点 技术操作简单 自动化程高 序列数量大 检测效率高 应用范围广 成本? 基因芯片发展历史 Southern Northern Blot Dot Blot Microarray 本质技术是什么？？？ 基因芯片的制作技术 光引导原位聚合技术 压电打印原位聚合技术 点模型 光引导原位聚合技术 首先使支持物羟