植物组织培养课件第3章实验室及基本的 操作.ppt

第三章;1. 实验室及基本设备;1.1 通用实验室 （准备室）;通用实验室的主要设备与仪器;通用实验室的主要设备与仪器;1.3 培养室;培养室的主要设备与仪器;培养室的主要设备与仪器;培养室的主要设备与仪器;培养室的主要设备与仪器;培养室的主要设备与仪器; 培养容器;植物组织培养 用的玻璃器皿 A ．T形管 B ．长方形扁瓶 C ．圆形培养瓶 D ．L形管 E ．角形培养瓶 F ．圆形扁瓶 G ．三角瓶 H．细胞微室培养用的玻璃环、盖玻片和载玻片 I ．平形有角试管 J ．平形无角试管; 试管 ——是植物组织培养中常用的一种玻璃器皿，特别适合于用少量培养基及试验各种不同配方时选用，在茎尖培养及花药和单子叶植物分化长苗培养时更显方便。试管有平底和圆底两种，一般选用20mmXl50m和30mX200m规格的试管较适宜。; 三角锥瓶 是植物组织培养中最常用的培养容器，适合于进行各种培养，如固体培养或液体培养，大规模培养或一般培养。大规模的振荡液体培养，通常使用300ml，500ml，甚至2000-3000ml的三角瓶。但在组织培养中用得最多的是50ml，100ml，150ml和300ml四种规格的三角瓶，其口径均为25mm。 三角瓶的好处：采光好，瓶口较小不易失水。缺点是价格较贵，易破损，且瓶矮，不适宜作单子叶植物的长苗培养研究。; L形管和T形管 ——为专用的旋转式液体培养试管。由于在管子转动时，管内培养的材料能轮流交替地处于培养液和空气之中，因而通气良好，有利于培养组织的正常生长。; 培养皿 ——适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和 无菌发芽。常用的规格为直径40mm，60mm，90mm和120mm。; 角形培养瓶和圆形培养瓶 ——适于液体培养用，如单细胞和原生质体的浅层培养。其中角形培养瓶用于静置培养，而圆形培养瓶用于胚的培养。; 果酱瓶 ——常用作为试管苗大量繁殖用的培养瓶，一般用200-500ml规格的果酱瓶、水果罐头瓶，因瓶口大，操作方便，可提高效率，减少材料消耗，加上价格低廉，透光好，空间大，材料生长健壮，已被许多组培工厂大量使用。但污染率高，灭菌和操作要严格，尽量降低污染率。;各种不同类型的容器都???用来培养植物材料。在有些情况下，容器的选择取决于实验性质；在另外一些情况下，则是取决于是否方便以及研究工作者的爱好。有时甚至牛奶瓶和罐头瓶也都可以利用。 不过在组织培养中只应使用硼硅酸盐玻璃器皿，钠玻璃对某些组织可能是有毒的，重复使用时毒害会更明显。 现在在很多实验室内，玻璃培养容器和制备培养基所需的其他玻璃器皿都已被塑料器皿所取代。有些塑料容器可以进行高压灭菌。;近几年在国外流行一种新型的聚丙烯塑料试管帽，透明，可进行高压灭菌，盖顶有一层薄膜，它可以阻止试管内水分的丢火，但不影响内外的空气交换。; 降低成本 培养室用电量大，成本高，为了节省能源降低成本可采取一些措施，例如，加大窗户，利用自然光；墙壁宜用隔热性能良好的材料(泡沫塑料)建成隔热层，少受外界温度影响。;中南林业科技大学经济林育种与栽培重点实验室;①不要与微生物工作者或病理工作者共用组织培养工作区； ②一经发现，立即将污染的培养物拿出培养室进行处理。;1.4 细胞学实验室(显微工作室）;1.5 温室;温室;温室;温室;2. 组织培养基本技术;清洗 灭菌 培养基的配置 接种 核心：无菌操作;无菌操作技术;2.1 清洗;2.1 清洗;2.2 灭菌;干热灭菌法 利用鼓风干燥箱(烘箱)进行烘烤灭菌的方法。此法适用于各种玻璃器皿和器械的灭菌消毒。方法是将清洗后的玻璃器皿和器械放入箱内，将箱温控制在150度，40min或120度，120min，即可达到灭菌效果。;湿热灭菌法 利用高压蒸汽灭菌的方法，此法适用于培养基、蒸馏水、各种器械、棉塞、包头纸等的灭菌。将高压蒸汽灭菌锅的压力调至118kPa，维持20—30min，即可达到灭菌效果。一般培养基灭菌掌握在108-118kPa压力，20min；无菌蒸馏水、器械、棉塞等为118kPa，30min；或者127kPa，20min。高压蒸汽灭菌时的压力，还需视高压灭菌锅的类型而定。; 熏蒸灭菌 利用药物熏蒸以达到灭菌的目的。此法适用于接种室和培养室的灭菌。如向甲醛内加入高锰酸钾，促进甲醛的快速挥发而起到熏蒸灭菌的作用。一般每立方米用甲醛2mL、高锰酸钾1g。但是为了避免材料中毒死亡，对有培养材料的培养室，可改用乙二醇加热熏蒸的方法，每m3用乙二醇6mL即可。; 过滤灭菌 培养基配制过程中，如