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动物细胞工程 Animal Cell Engineering 一 动物细胞工程基本概念： 原理和方法：细胞生物学,分子生物学及工程 学原理 对象：动物细胞 设计改造：动物细胞遗传性 目标：创造新物种，提供名贵药品及服务 二 动物细胞工程研究主要内容 ： 动物细胞培养技术 细胞融合技术 单克隆抗体技术（即杂交瘤技术） 动物细胞大规模培养技术 基因及细胞器染色体的改造与转移，核移植技术; 克隆技术 细胞反应动力学 动物细胞反应器 胚胎工程技术:试管婴儿胚胎移植、胚胎分割、胚 胎发育，胚胎干细胞技术  应用于生物高技术产业: 有价值的细胞产品:疫苗,抗体,酶和生长因子等。 细胞培养系统:毒品和药物检测 细胞治疗 基因治疗 组织工程 转基因动物及克隆动物 国内单克隆抗体药物为鼠源型或人鼠嵌合型，人源 性抗体还处于研究的起步阶段 东莞宏远逸士生物技术药业 国家一类新药 “恩博克乳膏”（抗人白细胞介素-8 单克隆抗体）----牛皮癣 第四军医大学基础部 国家一类新药 肝癌单抗放免诊断剂和治疗剂-----原 发性肝癌的体内定向诊断及体内导向治疗  第一节 动物细胞培养特性  及一般培养技术 一 动物细胞培养的概念 从动物体内取出细胞或组织，用物化方法使 其分散成游离细胞，在模拟体内生理环境的体外 条件下进行培养，使之生长繁殖的过程。 二 动物细胞培养特性 锚地依赖性（贴壁依赖性）: 大多数动物细胞只能附着或贴在固体或半固体表 面上培养才能生长． ? 例外：肿瘤细胞 ，血液，淋巴细胞  Vol 465/27 May 2010 Nature  成纤维细胞型 上皮细胞型 游走细胞型 多形细胞型 2 接触抑制性 : 当细胞长满于附着物表面， 相邻细胞表面间相互接触， 使细胞对数生长期停止进入稳定期， 细胞生长大大减慢，细胞生长，死亡 处于动态平衡。  3 群体效应： ----单个细胞难生长，聚集成团易生长 4 原代培养(Primary Culture)： （初代培养，初始培养） 定义:直接从机体取材（细胞，组织或器官）并置于 体外条件下生长到第一次移植继代培养。 原代培养细胞特点 １）一定程度上反映体内状态； ２）具二倍体遗传性状（至少７５％细胞与来源动物 的细胞核型（数目形态）相同）； ３）生物性状未发生很大变化； ４）用于研究基因表达，药物测试； ５）由多种细胞组成 5 移植继代培养（传代培养）： 移植继代培养号: ? 初代、二代、三代---------N代 细胞培养 细胞系和确立细胞系建立： 细胞系(cell line)---原代培养经第一次移植继 代培养成功后，形成的多种细胞群体为细胞 系。 确立细胞系－－－可永久性移植继代培养， 细胞形态，染色体结构发生变化，不具有群 体效应、锚地依赖性、接触抑制性，丧失组 织分化能力和脏器特异性，可悬浮培养。 有限细胞系、无限细胞系 7 细胞株和确立细胞株建立： 细胞株(cell strain)－－－从原代培养物或细胞系，通 过筛选或克隆培养，获得的具特殊性质或特殊标志 的单一类型细胞群体（如特殊抗原性，抗病毒性） 确立细胞株－－－可永久性移植继代培养的细胞株， 细胞形态，染色体结构发生变化。不具群体效应、 锚地依赖性、接触抑制性，丧失组织分化能力和脏 器特异性，可悬浮培养。 建立细胞株（系）的要求 ?美国ATCC细胞库的入库标准 ? 1）组织起源和已经传 ? 7）细胞形态 代的代数 ? 8）核型 ? 2）冻存液 ? 9）无菌检测：细菌、真 ? 3）细胞活力 菌等 4）培养液：培养基、 ? 10）物种检测：检测同 血清和抗生素 ? 5）融解后细胞生长特 工酶谱 ? 11）反转录酶检测 性 ? 6）接种存活率 ? 12）细胞建立者 ? 13）检测者  三 动物细胞培养液及配制 1 营养需求: 培养液的组成成分 氨基酸：氮源, 盐类：钠，钾，镁，钙，氯，硫酸根，磷酸根， 碳酸氢根离子等 葡萄糖：碳源, 供能 缓冲系统：CO2缓冲系统或HEPES 生长因子：EGF等 其它成分：维生素(辅酶)，矿物微量元素，有 机补充物，激素生长因子，嘌呤，嘧啶，谷胱 甘肽等 2 平衡盐溶液（BSS） 功效： 维持渗透压 提供缓冲系统调 节pH 提供水分和无机 盐. 配培养基和洗材 料用. 培养基类型 天然培养基 生长贴壁好 基本合成培养基(基础培养基) DMEM 完全培养基 无血清培养基  基本合成培养基＋补充因子 补充因子: 必需因子---细胞生长因子与激素 特殊因子---贴壁因子(纤粘连因子,层粘连因子) 蛋白酶抑制剂 其它常用液 消化液：胰蛋白酶、EDTA、 胶原酶 调节pH值: HEPES缓冲剂，NaHCO3溶液 四 动