酒精刺激激活nf-κb信号通路促进肝癌的生长和转移-alcohol stimulation activates nf - κ b signaling pathway to promote the growth and metastasis of liver cancer..docx

主要英文缩写一览表英文缩写NF-κB英文全称nuclear factor-k-gene binding中文缩写核转录因子 NF-κBROSreactive oxygen species活性氧基团或分子HCCHepatocellular Carcinoma肝细胞肝癌VEGFVascular endothelial growth factor血管内皮细胞生长因子FCMFlow Cytometry流式细胞仪DAPI4,6-diamino-2-phenylindole4,6-二氨基-2-苯基吲哚FBSFetal bovine serum胎牛血清DMEMDulbeeeo’5ModifiedEagle’5Medi达尔伯克（氏）改良伊格尔（氏）um培养基PBS EtOHPhosphate-buffered saline Ethyl alcohol磷酸盐缓冲液乙醇HEHematoxylin-esoin苏木素-伊红染色IHCImmunohistochemistry免疫组化DMSODimethyl Sulfoxide二甲基亚砜PAGEPolyacrylamide gel electrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳BECBlood ethanol concentration血液酒精浓度AMVDAverage microvessel density平均微血管密度rpmRotate per minute每分钟转速ODOptical density光密度PMSFPhenylmethane sulfonyl fluoride苯甲基磺酰胺secSecond秒hHour小时IL-3Interleukin-3白细胞介素-3minMinute分钟酒精刺激激活 NF-κB 信号通路促进肝癌的生长和转移中文摘要肝癌是全球第五大常见的恶性肿瘤，占肿瘤致死原因的第 3 位，据统计每年有超过 50 万新增肝癌患者，而其中一半以上在中国。而肝癌的病因及确切分子机 制尚不完全清楚，目前认为肝癌的发生发展与肝炎病毒和寄生虫的感染、遗传因 素、自身免疫及内分泌因素、地域环境因素、不良的日常生活习惯等方面有关。 随着人类生活水平的不断提高和节奏的加快，生活因素对人类健康的影响越来越 受到人们的重视，其中吸烟和饮酒是影响人类健康常见的不良生活习惯。流行病 学资料显示，饮酒可以增加罹患肿瘤的危险性，主要表现在消化道肿瘤和乳腺肿 瘤。另有实验研究发现酒精不仅促进肝癌的发生，也与其发展有关，包括侵袭和 转移等恶性生物学行为的发生，缩短患者生存时间。但是酒精影响肝癌发展的具 体机制不是很清楚。酒精对肿瘤影响在体内外的机制有明显不同。在体内酒精需要经过多种氧化 酶体系氧化分解，在氧化途径中都会导致大量氧自由基的产生、致癌物质活化增 强以及细胞过度再生和营养缺乏等。促进炎性因子及血管生成因子分泌，以及使 相关信号通路激活，促进肿瘤生长和转移。在体外，酒精刺激直接作用于肿瘤细 胞使促炎症因子和表皮生长因子分泌增多，促进活性氧自由基（ROS）的释放， 增强基质金属酶（MMP-2）的活性，以及直接影响细胞内信号活化传递，促进肿 瘤的生长和转移。酒精在体内外对肿瘤的影响机制的共同点即引起 ROS 升高。ROS 作为重要的细胞内信使，其增加可以导致多种氧化还原敏感性转录因子的活化， 包括 NF-κB,AP-1，STAT 等，而 NF-κB 是非常重要核转录因子与肿瘤恶性生物学 行为密切相关。NF-κB 的活化参与细胞增殖、分化、迁移和粘附能力以及细胞周 期与分化的调控；与肿瘤的发生、生长和转移等多个过程有关。本研究拟探索酒精是否通过引起细胞 ROS 促进 NF-κB 途径活化从而介导肝癌 的进展。首先在体外用 0.2%酒精刺激培养，流式细胞术的方法检测细胞 ROS。结 果显示酒精刺激可引起细胞内 ROS 水平升高，而应用 C3G 及 PDTC 保护可以有效的抑制。为了探索 ROS 是否会引起与肿瘤生长转移密切相关的 NF-κB 信号的活化，分别运用蛋白质印迹方法和转染 NF-κB-luciferase 报告基因质粒的方法检测酒精对 信号通路的影响。结果都显示酒精可以激活 NF-κB 信号通路，而抗氧化剂 C3G 可以抑制 NF-κB 的活化，证明酒精刺激肿瘤细胞通过引起 ROS 增高从而促进 NF-κB 信号通路的活化。为了进一步证明酒精对肝癌的影响，检测它对肿瘤恶性 生物学行为的作用，MTT 方法检测细胞增殖，细胞划痕实验和 transwell 检测细胞 迁移能力，结果发现酒精可以促进 HepG2 细胞的迁移，而 C3G 或 PDTC 预处理后 都可以抑制，而对细胞增殖没有明显影响。肿瘤的生长转移依赖于新生血管的生 成。为了研究酒精对肿瘤血管生成的作用，我们用 HepG2 细胞与人脐静脉内皮细 胞（