抗有丝分裂靶点liv1的分子调控机制分析-molecular regulatory mechanism analysis of anti-mitotic target li v1.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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抗有丝分裂靶点liv1的分子调控机制分析-molecular regulatory mechanism analysis of anti-mitotic target li v1.docx

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抗有丝分裂靶点liv1的分子调控机制分析-molecular regulatory mechanism analysis of anti-mitotic target li v1

第一部分抗有丝分裂靶点LIV1的分子调控机制研究中文摘要目的：通过抗有丝分裂杀灭肿瘤细胞是肿瘤化疗的主要策略之一，而传统的微管毒性药物选择性差、副作用大，新一代的抗有丝分裂剂不能有效杀灭有丝分裂逃逸的细胞，因此如何有效杀灭有丝分裂逃逸细胞是增强抗有丝分裂化疗药物的根本出路。在我们的前期研究中，通过SMART技术筛选出效应基因LIV1，在随后的研究中，逐渐发现LIV1是有丝分裂检测点非常关键的调控基因。方法：MTT检测下调LIV1表达后化疗药物对细胞活性的影响；靶向LIV1的siRNA短暂下调LIV1表达后，通过流式检测其对抗有丝分裂药物的诱导的周期阻滞和凋亡的影响；免疫荧光检测LIV1在细胞中的定位；流式及激光共聚焦检测过表达LIV1后对细胞周期及凋亡方面的影响。免疫组化检测LIV1在肿瘤中的表达及临床的相关性。结果：AS-LIV1稳筛的细胞株下调LIV1表达后，细胞抵抗TSA诱导的凋亡，同时抵抗抗有丝分裂药物诱导的凋亡，而对顺铂诱导的凋亡无抵抗作用；siRNA干扰LIV1表达后，抵抗Paclitaxel处理后引起的细胞活性降低；LIV1的丢失有丝分裂检测点失活，使肿瘤细胞逃逸抗有丝分裂药物引起的有丝分裂阻滞，逃逸了抗有丝分裂药物诱导的凋亡，并能够进行正常的有丝分裂；shake-off实验显示下调LIV1后加快了有丝分裂期进程并引起细胞在有丝分裂期染色体排列异常并出现未成熟染色体分离；长期下调LIV1表达后会出现微核、多核、多条X染色体或单条染色体等染色体不稳定性的表现；过表达LIV1后检测发现LIV1定位于内质网，更重要的是过表达LIV1可以引起强烈的肿瘤细胞凋亡。同时多种肿瘤中LIV1出现表达缺失且其缺失与肿瘤的病理分级相关。结论：因此我们提出LIV1及其调控的通路是抗肿瘤有丝分裂较好的分子靶标。通过深入研究LIV1及其通路如何调控生理和病理状态下的细胞有丝分裂、最终通过寻找LIV1表达增强可以获得有效的肿瘤拮抗药物，为肿瘤的治疗开辟新的靶点和方向。【关键词】：LIV1，有丝分裂检测点，有丝分裂逃逸，抗有丝分裂靶点；分子调控机制Part1MolecularregulationmechanismoftheantimitotictargetLIV1AbstractAim：Drugsthatperturbtheprocessofcelldivisionhaveprovedtobeeffectiveinanticancertherapies.Traditionalmicrotubuletoxicdrugsarepoorselectivity,andhavesideeffects,andnewgenerationanti-mitoticagentscannotkillthemitoticslippagecellseffectively.Therefore,howtoeffectivelykillthemitoticescapecellsisthemainissuestoenhancetheeffectiveofanti-mitoticdrugs.Inourpreviousstudy,wescreeningouttheeffectivegeneLIV1bySMARTtechnology,andinthefollowupstudy,wegraduallyproveLIV1isakeyregulatorofmitoticcheckpoint.Method:ThecellviabilityindifferenttreatmentswasdeterminedbyMTT；WhenthesiRNAdepletedtheLIV1expression,themitosisandapoptosisinducedbyanti-mitoticdrugsweredetectedbyflowcytometry;ImmunofluorescenceassayedtheLIV1cellularlocalization;FlowcytometryandconfocallaserscanninganalyzedcellcycleandapoptosisincellsexpressedexogenousLIV1.ImmunohistochemicaldetectedtheclinicalcorrelationbetweenLIV1expressionandtumors.Results:AS-LIV1stablecellswithdepletionofLIV1expressionwereagainstTSA-inducedapoptosis,whileresistanttoanti-mitoticdrug-inducedapoptosis,butnotresistantt