雷公藤内酯醇对大鼠海马内注射β-triptolide was injected β into hippocampus of rats.docx

摘要目的：阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease，AD）的发病机制至今仍未完全明了，近年来，AD的免疫炎症学说受到了越来越多的关注。雷公藤内酯醇是我国独创的一种具有抗炎、免疫抑制作用的药物。大量的研究表明，雷公藤内酯醇具有明确的神经保护作用。我们的前期工作也显示，雷公藤内酯醇可以缓解AD模型大鼠海马神经元树突棘的退化。树突棘的主要细胞骨架成分是肌动蛋白，树突棘形态的改变是通过树突棘内肌动蛋白的重排而实现的。肌动蛋白的重排主要受肌动蛋白结合蛋白的调节，发育调节脑蛋白（developmentallyregulatedbrainprotein，drebrin）和丝切蛋白（cofilin）是调节树突棘形态的两个主要的肌动蛋白结合蛋白。本实验观察雷公藤内酯醇对AD模型大鼠海马神经元drebrin和cofilin表达的影响，从树突棘结构重塑的角度来探讨雷公藤内酯醇对AD的作用机制。方法：1、45只SD雄性大鼠等分成对照组、模型组、用药组。大鼠右侧海马内一次性注射凝聚态Aβ1－40设为模型组，大鼠右侧海马内注射等量生理盐水设为对照组，用药组大鼠在右侧海马注射凝聚态Aβ1－40后腹腔注射雷公藤内酯醇0.4mg·kg-1，共15d。2、Golgi染色用于检测各组大鼠海马神经元树突棘密度的变化。3、免疫组织化学染色用于检测各组大鼠海马神经元drebrin和cofilin表达的变化。4、RT-PCR用于检测各组大鼠海马神经元drebrinmRNA和cofilinmRNA表达的变化。结果：1、Golgi染色结果显示，对照组大鼠海马神经元树突棘数量多而密集，模型组大鼠海马神经元树突棘密度明显低于对照组（P＜0.01），用药组大鼠海马神经元树突棘密度明显高于模型组（P＜0.05）。2、drebrin免疫组织化学染色结果显示，和对照组相比，模型组大鼠海马IIdrebrin免疫反应阳性细胞数量明显减少（P＜0.01），平均光密度明显降低（P＜0.01）；用药组大鼠海马drebrin免疫反应阳性细胞数量较模型组明显增多（P＜0.05），用药组大鼠海马drebrin免疫反应阳性细胞平均光密度较模型组略有升高，但无统计学意义（P＞0.05）。3、cofilin免疫组织化学染色结果显示，与对照组比较，模型组大鼠海马cofilin免疫反应阳性细胞数量明显增多（P＜0.01），平均光密度明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，用药组大鼠海马cofilin免疫反应阳性细胞数量明显减少（P＜0.05），平均光密度明显下降（P＜0.01）。4、drebrinRT-PCR检测显示，模型组大鼠海马drebrinmRNA的表达明显低于对照组（P＜0.01）；用药组大鼠海马drebrinmRNA的表达明显高于模型组（P0.05）。5、cofilinRT-PCR检测显示，模型组大鼠海马cofilinmRNA的表达明显高于对照组（P＜0.01）；用药组大鼠海马cofilinmRNA的表达明显低于模型组（P0.01）结论：雷公藤内酯醇能增加AD模型大鼠海马神经元drebrin的表达，抑制AD模型大鼠海马神经元cofilin的表达。关键词：雷公藤内酯醇；阿尔茨海默病；发育调节脑蛋白；丝切蛋白IIIABSTRACTObjective:AlthoughtheexactcauseofAlzheimer’sdisease(AD)remainsunclear,itspathogenesisisthoughttoinvolveneuroinflammation.Triptolidehasanti-inflammatoryandimmunosuppressiveactivities.Increasingevidencehasshownthattriptolidecanexertneuroprotectiveeffects.OurpreviousstudysuggestedthattriptolidecanrelievethedegenerationofdendriticspinesinhippocampalneuronsinADmodelrats.Thecytoskeletonofdendriticspinesiscomposedprimarilyofactinfilaments.Changesindendriticspinemorphologydependonthereorganisationoftheactincytoskeleton.Thislatterismainlyregulatedbyactin-bindingproteins.Amongactin-bindingproteins,drebrinandcofilinhaveimportantinfluenceonspinemorph