第一章 酶学和 与酶工程 (2~5节) 酶工程课件.pptVIP

竟争性抑制 （二）非竞争性抑制 底物与抑制剂同时和酶结合，两者没有竞争 作用。 非竞争性抑制 d. 变形或张力 e. 酶的活性中心为疏水区域 酶的活性中心为酶分子的凹穴 此处常为非极性或疏水性的氨基酸残基 第三节 酶作为催化剂的显著特点 一． 催化能力 二． 专一性 三. 调节性 一．催化能力 催化常数kcat （或转换数，TN）：每个酶分子每分钟催化底物转化的分子数。 一般为103min-1，碳酸酐酶最高为3.6* 107min-1 有酶加入比无酶参加反应速度一般要高107-1013 二．专一性 1．绝对专一： 只催化一种底物进行快速反应，甚至是立体专一性 2 相对专一性：基团专一和键专一 三. 调节性 1. 酶浓度的调节 2 激素调节 3. 共价修饰调节 4. 限制性蛋白水解作用与酶活力调控 5. 抑制剂的调节 6. 反馈调节 7. 金属离子和其他小分子化合物的调节 第四节 酶促反应动力学 酶促反应动力学（kinetics of enzyme- catalyzed reactions）是研究酶促反应的速度以 及影响此速度的各种因素的科学。 酶促反应动力学的研究既有重要的理论意义， 又具有一定的实践意义。 一、底物浓度对酶反应速度的影响 （一）中间络合物学说 1903年Henri用蔗糖酶水解做实验，研究底物浓度 与反应速率的关系。当酶浓度不变时，可以测出一系 列不同底物浓度下的反应速度，以反应速度对底物浓 度作图，可得一双曲线。从该曲线可以看出，当底物 浓度较低时，反应速率对底物浓度的关系呈正比关 系，表现为一级反应。随着底物浓度的增加，反应速 率不再按正比升高，反应表现为混合级反应。当底物 浓度达到相当高时，底物浓度对反应速率影响变小几 乎无关，反应达最大速率，为零级反应。 根据上述实验结果，Henri和Wurtz提出酶底 物中间络合学说。 （二）酶促反应的动力学方程式 1. 米氏公式的推导 1913年Michaelis和Menten在前人工作的基础 上，根据酶反应的中间复合物学说，推导出底物浓 度与酶反应速率之间的定量关系，称之为米氏方程： Vmax [S] Ks + [S] V0 = 1925年Briggs和Haldane提出了稳态学说，对米氏方程作了修正，认为酶促反应分为两步进行： （1）酶与底物作用形成酶-底物复合物（ES）； （2） ES复合物分解形成产物，释放出游离酶。 他们认为，许多酶催化反应的k2很高，k2不仅不特小于k－1， 而且远比k－1大，即ES分解成E和P的速度比解离成E和S的速度快。该学说认为，在反应进行了一段很短的时间后，[ES]由0增加到一定数值，然后保持不变，即达到稳态水平，这时生成ES的速度与ES分解和解离的速度相等。 The term (k2 + k-1)/k1 is defined as the Michaelis-Menten constant, Km. An important numerical relationship emerges from the MichaelisMenten equation in the special case when V0 is exactly one-half Vmax。 If [S]Km, 2. 动力学参数的意义 （1）米氏常数的意义 ① Km是酶的一个特征常数，Km的大小只与酶的性质有关，而与酶浓度无关。但必须固定在某一反应条件下（pH、温度、离子强度等）才能保持不变。若一个酶可以催化多种底物反应，则对不同底物有不同的Km值。 ② Km值可以判断酶的专一性和天然底物，1/Km可近似地表示酶对底物亲和力的大小。 ③ Km与Ks：Km=k-1+k2/k1，Ks=k-1/k1 ④ 若已知某酶的Km值，就可以计算在某一底物浓度时，其反应速率相当于Vmax的百分率。 ⑤ Km值可以帮助推断某一代谢反应的方向和途径。 （2）Vmax和k2（kcat）的意义 在一定酶浓度下，酶对特定底物的Vmax也是一 常数。Vmax与Km相似，同一种酶对不同底物的 Vmax也不同，pH、温度和离子强度等因素也影响 Vmax的数值。 （3）kcat/Km的意义 亦称为表观二级常数，酶的专一性常数 Kcat/Km值的大小，可以比较不同酶或同一种 酶催化不同底物的催化效率。比较竞争底物的专一性，根据kcat/Km值而不是Km值。 对于一个酶促反应而言，当kcat/Km值达到108 ～109S-1M-1 时，限速步骤在于酶与底物结合中的分子扩散，达到