全国版2019版高考生物一轮复习第35讲基因工程培优学案.docVIP

第35讲　基因工程 [考纲明细]　1.基因工程的诞生(Ⅰ)　2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(Ⅱ)　3.基因工程的应用(Ⅱ)　4.蛋白质工程(Ⅰ)　实验：DNA的粗提取与鉴定板块一　知识·自主梳理一、基因工程的概念及基本工具 1．基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。 2．DNA重组技术的基本工具 (1)限制性核酸内切酶(简称：限制酶) ①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 ②作用：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 ③结果：产生黏性末端或平末端。 例：如下图所示，EcoRⅠ限制酶识别的碱基序列是—GAATTC—，切割位点在G和A之间；SmaⅠ限制酶识别的碱基序列是—CCCGGG—，切割位点在G和C之间；说明限制酶具有专一性。 ④本质：蛋白质。 (2)DNA连接酶 ①作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成新的DNA分子。 ②类型 DNA连接酶和限制酶的关系 (3)载体 载体的作用：携带外源DNA片段进入受体细胞。 常用载体：质粒。其他载体：λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。 质粒 a．概念：质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。 b．特点：能自我复制；有一个至多个限制酶切位点；有特殊标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 二、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 (1)从基因文库中获取 前提条件：目的基因序列未知。 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，可分为基因组文库和部分基因文库(如cDNA文库)。 构建过程 (2)利用PCR技术扩增目的基因 PCR含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 PCR原理：DNA双链复制。 前提条件：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。 要求 模板：目的基因两条链。 原料：四种脱氧核苷酸。 酶：热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。 引物：人工合成的两条DNA片段(引物1，引物2)。 ⑤PCR反应过程 ⑥方式：指数形式扩增(2n，n为扩增循环的次数)。 ⑦结果：短时间内大量扩增目的基因。 (3)人工合成 ①前提条件：核苷酸序列已知，基因比较小。 ②方法 a．反转录法：目的基因的mRNA单链DNA双链DNA(目的基因) b．化学合成法：蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列目的基因的核苷酸序列目的基因 2．基因表达载体的构建——基因工程的核心 (1)操作目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。 (2)组成 (3)构建过程 3．将目的基因导入受体细胞 (1)目的基因导入植物细胞 ①农杆菌转化法：最常用的方法。 a．受体细胞：植物体细胞或受精卵。 b．操作过程：将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上―→转入农杆菌―→导入植物细胞―→T-DNA上的目的基因整合到受体细胞的染色体DNA上―→目的基因表达。 ②基因枪法：适用于单子叶植物，成本较高。 ③花粉管通道法：将目的基因通过花粉管通道导入受体细胞，十分简便经济。 (2)目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射技术。 ②受体细胞：动物的受精卵。 ③操作过程：将含有目的基因的表达载体提纯―→取卵(受精卵)―→显微注射―→受精卵经胚胎早期培养后，移植到雌性动物的输卵管或子宫内―→获得具有新性状的动物。 (3)目的基因导入微生物细胞 ①转化方法 a．用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细胞称为感受态细胞)。 b．感受态细胞吸收重组表达载体DNA分子。 ②受体细胞：原核细胞(使用最广泛的是大肠杆菌)。 ③原核生物的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 4．目的基因的检测与鉴定 (1)不论是复制水平、转录水平还是翻译水平的检测，都是在体外进行的。 (2)在DNA分子、mRNA分子上检测目的基因是否插入、目的基因是否转录时，用的探针都是放射性同位素等标记的含有目的基因的DNA片段。 三、基因工程的应用 1．转基因植物 植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力(如抗除草剂、抗虫、抗病、抗干旱和抗盐碱等)，以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。 2．转基因动物 动物基因工程在动物品种改良、建立生物反应器、器官移植等方面显示了广阔的应用前景。 3．基因工程药物 (1)来源：转基因的工程菌。 (2)成果：细胞