第四讲组合化学与生物合成 现代生物技术知识与新药研究 .pptVIP

第四讲 筛选新药之‘化合物’的重要源泉;主要内容;组合化学是一项新型化学技术，他利用一系列合成、测试技术，在短时间内合成数目庞大的有机化合物，经过高效生物活性筛选，从中发现一批具有活性的药物前体。 组合化学是应生物学家建立起来的高通量筛选技术的需要而产生的。 组合化学合成技术已经给传统的有机合成化学带来了革命性的变化，是近年来科学上取得的重要成就之一。;;组合化学最早起源于固相多肽合成。就本质而言，组合化学是建立在高效平行的合成之上的，这种合成方法步骤有限，但生成的化合物库内包含大量化合物。 组合化学不是单一的一种技术，它包含了一系列化学技术。它是一门交叉性学科，它以有机化学为基础，与生物化学、药物化学密不可分，并涉及到数学、物理和计算机等多门科学。而传统有机合成方法是对单个分子分步合成，在数量上是处于低层次的，合成速度太慢，无法满足对化合物量的需要。;;组合化学;组合化学基本原理 ;组合化学策略;既是在反应体系中多种反应物混合在一起进行反应，得到多种产物如：正丁酸与醇缩合形成酯的反应。;平行合成方式;组合合成技术;高通量筛选 High Throughput Screening;固相合成法;;HPLC-MS analysis of an equimolar mixture of 16 heterocyclic compounds generated by a split and combine synthesis ;固相合成的优点;树脂珠的种类;聚苯乙烯和聚酰胺树脂通常缺乏结构上的刚性，不能用于需要长期溶剂化而达到连续流动合成的目的。 因此人们又设计了许多新型大孔高聚物，其中较好的是多孔玻璃，它是一种刚性的衍生化的玻璃球状物，可以与任何溶剂相容，对腐蚀性溶剂和高压、高温都比较稳定。;合成方法;混合均分法 Mix-Split;图例;其他固相合成方法;由于应用固相合成的化学反应范围有限，而且当反应物和产物连接到固相载体上时，检测反应过程比较困难，因此人们重新研究了液相合成方法。 ;由于液相合成存在一些不确定性，在合成的每一步之后均需进行某种形式的纯化，如果用平行合成大量的化合物，进行纯化的工作是相当烦琐的，如果用混合物方式合成，那么，纯化过程几乎是不可能的。 因此人们将传统的液相合成的优点与固相合成的优点结合起来，从而形成了液体相合成方法。 其原理是将化合物结合到一种可溶性高分子上，反应后，经过调节反应体系的溶剂、离子强度、pH等使高分子从溶液中沉淀下来。 目前使用的有聚乙烯醇单甲醚，它可以溶解在多种溶剂中，但在乙醚中可以结晶析出。;药物合成与筛选 催化剂的合成与筛选 高分子试剂的合成与筛选 酶抑制剂的合成与筛选 酶催化的组合合成;发展状况;二、定向生物合成（Directed Biosynthesis);生物合成工程;定向生物合成; ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ; ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????;;;四、抗生素基因工程简介;抗生素药物基因工程实用化平台;基因工程;限制性内切酶;运载体必须具有三个条件：①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制；②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入；③有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。 ;质粒载体;目的基因的制备 ;? 把纯化的DNA导入细菌细胞的过程称为转化。原核细胞的转化过程就是导入外源DNA的过程。对于大肠杆菌来说，人们一般采用先用冰冷的CaCl2处理，然后置于42 ℃高温下帮助其吸收外源的DNA，这种方法的最大转化频率为10-3，其效率是每微克DNA一般可以转化107～108个细胞。目前CaCl2转化方法的机制尚不清楚，可能是细胞壁被打了一些孔，DNA分子从这些孔洞中进入细胞，而这些孔洞随后又可以被宿主细胞修复。可以接受DNA的细胞称为感受态细胞。大肠杆菌需要诱导才能变成感受态细胞，而有些细菌细胞则在自然条件下，或是在改变培养基和其他培养条件下就可变成感受态细胞。 ;透明颤菌血红蛋白基因（vgb);透明颤菌血红蛋白的应用;Aad-Cyc-Val(ACV);7-氨基青霉烷酸(7-ACA);;基因工程改造CPC产生菌;;;五、‘聚酮体途径’抗生素的生物合成;;1 放线紫红素（Actinorhodin）;聚酮