遗传学课件第10章基因诊断与基因基本治疗-4h.ppt

Germline vs. Somatic gene therapy 生殖系基因治疗：将治疗的靶基因导入生殖细胞，导入的基因将传递给后代。 目前仅限于实验动物，转基因动物／胚胎干细胞。 体细胞基因治疗：将治疗的靶基因导入患者体细胞，对生殖系无影响，不会将遗传改变传递给后代。 一般以疾病细胞（或正常的免疫细胞）为受体细胞。 1、生殖细胞基因治疗 为理想的治疗方法，从根本上可治疗遗传病，使其有害基因不能在人群中散播。 存在问题 1）靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性进展； 2）基因转移效率不高，只能用显微注射方法； 3）适用于排卵周期短而次数多的动物。 （目前辅助生殖技术的发展有效的解决了单次获取多个卵细胞的办法。一次可获取少者3-5个，多者十几个。） 2、体细胞基因治疗 将正常基因转移到体细胞，使之表达基因产物，以达到治疗的目的。仅能影响患者，但有害基因能遗传给后代。 优点： （1）随机整合到非特定座位，只要有效表达即可达到治疗的目的。 （2）理论上不必矫正所有的体细胞，适用于AR、XR疾病。 缺点：随机插入可能引起后代的基因突变。 正常基因导入靶细胞，定位整合到染色体上，准确替换异常基因，是理想的结果。 基因治疗的策略 基因添加疗法 (Gene augmentation therapy) 靶向杀伤特异细胞 (Direct killing of disease cells) Immune system-assisted cell killing 靶向抑制基因表达 (Targeted inhibition of gene expression) 靶向修正缺陷基因 (Targeted gene mutation correction) In vivo 和 Ex vivo 基因导入 A B Southern blot 检测结果： αα/αα αα/α- αα/- - α- /- - - - / - - 正常 缺1 缺2 缺3 缺4 14kb 10kb 缺失型遗传病的直接基因诊断 Southern-RFLP 检测β地贫?地中海贫血→ ?珠蛋白基因部分缺失 DMD的基因诊断 DMD属XR DMD基因是最大的致病基因，有79个外显子 DMD基因突变主要以缺失为主，可涉及基因的不同部位 E1 E2 E3 缺失型遗传病的直接基因诊断 病例 外显子 1 2 3 4 5 6 7 8 Pm 3 43 50 13 6 47 60 52 bp 535 113 缺失型遗传病的直接基因诊断 三、间接基因诊断方法及实例 当致病基因虽然已知，但其异常性质未知时，或疾病基因本身尚未知时，主要通过DNA多态的连锁分析间接地作出诊断。 应用条件：遗传标记与易感基因在染色体上连锁 遗传标记：基因组DNA多态，如RFLP，VNTR，SNP等 连锁分析过程： 1、首先确定家系中先证者致病基因与DNA多态等位片段间的连锁关系； 2、检测家系成员DNA多态性结果； 3、分析待检者是否遗传到带有致病基因的染色体，间接推断患病情况。 连锁分析 Southern blot--RFLP诊断(PKU) PAH基因两侧有MspⅠ酶切位点; 用该酶消化可产生23kb、19kb 两种等位片段; 以PAH cDNA为探针与PKU家系成员外周血DNA杂交。 间接基因诊断 患者为19kb片段的纯合子，说明患者缺陷的PAH基因与19kb片段连锁。 其父、母亲缺陷的PAH基因与19kb片段连锁，其23kb片段与正常PAH基因连锁。 II2为23kb和19kb片段的杂合子，为表型正常的致病基因携带者。 间接基因诊断 成年型多囊肾病的诊断 成年型多囊肾病——APKD，AD ，临床表现为腰痛，蛋白尿，血尿，高血压，肾盂性肾炎，肾结石。最终导致肾功能衰竭和尿毒症。 APKD——基因定位16p13，但致病基因尚未克隆，基因产物的生化性质和疾病发病机理也尚未阐明，但已证实APKD 基因与α珠蛋白基因3′端附近的一段小卫星DNA序列（3′HVR）紧密连锁，因此，可以通过RFLP连锁分析进行诊断。 间接基因诊断 以3′HVR为探针，与PvuII酶切后的家系有关成员的基因组DNA进行Southern