高效液相色谱法 现代食品检测技术知识 .pptVIP

高效液相色谱法high Performance lipid chromatography;第一节 概述 ;*;三、HPLC与经典LC区别;高效液相色谱仪流程图;一、HPLC基本知识;续前; 第二节 基本理论;一、HPLC基本知识;一、HPLC基本知识;一、HPLC基本知识;一、HPLC基本知识;一、HPLC基本知识;一、HPLC基本知识;一、HPLC基本知识;一、HPLC基本知识;一、HPLC基本知识;二、塔板理论 (马丁， 1941);三、速率理论（与GC对比）（Van Deemter，1956） ;3）传质阻抗项及其影响 可分为流动相传质阻力项Hm和固定相传质阻力项Hs。 a. 流动相传质阻力项： 组分分子由流动相移向固定相表面进行两相之间的能量交换所受到的阻力 Hm=Cmdp2u/Dg 式中：Cm为与k有关的函数，dp固定相颗粒直径，Dm组分在流动性中的扩散系数。 b. 固定相传质阻力项Hs 分子进入固定相后，扩撒到固定相内部，达到分配平衡后，又回到界面再逸出界面被流动相带走所受到阻力。 Hs=CsDf2u/Ds 式中：Cs为与k有关的常数，Df固定液的液膜厚度，Ds试样分子在固定液中的扩散系数。它与气相色谱法中传质阻力项的含义相同。 ;图示;改善HPLC分析措施：①进样时间要短。②填料粒度要小。③改善传质过程。过高的吸附作用力可导致严重的峰展宽和拖尾，甚至不可逆吸附。④适当的流速。⑤较小的检测器死体积。;柱外效应速率理论研究的是柱内峰展宽因素，实际在柱外还存在引起峰展宽的因素，即柱外效应（色谱峰在柱外死空间里的扩展效应）。色谱峰展宽的总方差等于各方差之和，即：σ2＝σ2柱内＋σ2柱外＋σ2其它柱外效应主要由低劣的进样技术、从进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死体积所引起。为了减少柱外效应，首先应尽可能减少柱外死体积，如使用零死体积接头连接各部件，管道对接宜呈流线形，检测器的内腔体积应尽可能小。;高效液相色谱仪流程图;;*;*;*;溶剂进入： 活塞收回、腔内形成低压 入口阀打开，出口阀感应压差而闭合 溶剂输出： 活塞推出、腔内压力增加 出口阀打开，入口阀感应压差而闭合 单向阀的特点： 密封性能相当好 可以非常敏感地感应压差而迅速闭合 这种泵具有清洗容易，更换流动相方便等优点，但脉动性较大是其缺点。目前多采用双泵补偿法来克服这一问题。 ;并联往复泵的工作原理;泵的使用注意事项 ①防止任何固体微粒进入泵体。 ②流动相不应含有任何腐蚀性物质。 ③泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。 ④输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。 ⑤流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无法正常工作。;;;*;高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography;*;*;进样阀;手动进样阀的进样;进 样—层 流 效 应;进 样—层 流 效 应;进 样—进 样 量;*;*;四、检 测 器 ;检 测 器 分 类;检测器的噪音和漂移;检测器的技术指标;紫外-可见波长检测器 （UV Detector）;;理论检测限估算; 紫外-可见波长检测器的光学系统;二极管阵列检测器 Diode Array Detector;;二极管阵列检测器的数据分析功能;荧光检测器Fluorescence Detector ;荧光检测器 选择性和灵敏度均较高紫外检测器高。;荧光检测器 有机发光化合物分为三类：（1）具有刚性结构的芳香稠环化合物；（2）具有共轭结构的分子内电荷转移化合物； （3）某些金属有机物（Al3+, Mg2+）与一些有机物形成配合物。;示差折光检测器 Differential refractive index detector ;示差折光检测器光学系统; 示差折光检测器的特点 ;示差折光检测器的特点（续）;蒸发光散射检测器 Evaporative Light-scattering Detector;;蒸发光散射检测器;*;*;*;*;*;*;*;*;第五节 高效液相色谱法分类;*;*;*;*;*;二、流动相 在液液色谱中，除一般要求外，还要求流动相对固定相的溶解度尽可能小，因此固定液和流动相的性质往往处于两 个极端，例如当选择固定液是极性物质时，所选用的流动相通常是极性很小的溶剂或非极性溶剂。 a. 正相液液