现代生物科技专题系列精辟解读.pptVIP

2.基因工程的核心步骤：基因表达载体的构建 蛋白质工程流程： 细胞工程、胚胎工程 方法 相关信息 利用PCR技术合成 步骤：变性/双链解开（95℃）； 复性/引物与单链的相应互补序列结（55℃）； 延伸：在DNA聚合酶作用下延伸（72℃） 人工合成 方法：用DNA合成仪化学方法合成 条件： a.基因比较小b核苷酸序列已知 从基因文库中取 可以从基因组文库，也可以从部分基因组文库 基因工程 1、目的基因获取的三种方法 注：用某生物某时期细胞中的mRNA反转录合成的DNA叫cDNA,无启动子，同生物不同细胞合成的是不同的 基因表达载体包括5部分： 启动子：与RNA聚合酶结合，驱动基因转录产生mRNA（想要人的血清白蛋白在牛乳汁中成功表达，在构建表达载体时需要在目的基因前加上 ） 标记基因：鉴别受体细胞中是否有目的基因，从而将含目的基因的细胞筛选出来。 gkxx网 下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性金银，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。DNA连接酶对DNA片段没有选择性据图回答： 图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 HindⅢ和BamHⅠ 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 氨苄青霉素的培养基上进行。 植物 最常用：农杆菌转化法（双子叶） 基因枪法（单子叶） 花粉管通道法（简便经济） 体细胞就可，但分化程度低，具分裂能力更易成功 动物 显微注射技术 受精卵：具全能性，可使外源基因在相应的组织细胞中表达 去核卵母细胞:（用于核移植技术） a体积大，易操作b营养物质丰富c含有促进细胞核全能型表达的物质 胚胎干细胞：具备全能性 微生物 ca2+处理法：使细胞变为感受态细胞 优点：繁殖快，多为单细胞，遗传物质较少，易使目的基因表达 细胞名称 导入方法 细胞要求 如果用一种限制酶去切割将会出现： 目的基因-载体连接物、目的基因-目的基因连接物 载体-载体连接、（自身环化）目的基因-载体连接物反向连接（目的基因与运载体发生任意链接）四种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离纯化 检测物质 方法 指标 分子 水平 目的基因是否插入受体染色体DNA上 目的基因是否转录出mRNA 目的基因是否翻译成蛋白质 DNA分子杂交原理：用标记的目的基因 作探针，与从细胞中提取的染色体组和 mRNA进行杂交 抗原-抗体特异性结合： 是否显示杂交带 个体 水平 检测性状 如：抗虫接种、抗药接种等 效果 4.目的基因的检测和表达： 注：由于外源基因可能随机插入到受精卵的DNA中，因而有的可发育成转基因牛，有的却死亡，请分析因外源基因的插入而导致早期胚胎死亡的最可能原因是外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达。 ： 预期的蛋白质功能----①----预期的蛋白质结构-----②------应有的氨基酸序列---③----应有的脱氧核苷酸序列（目的基因）-----④-----mRNA--⑤---蛋白质 1.难度较大的是：①② 2.能发生碱基互补配对的是：③④⑤ 3.③过程的依据有：氨基酸对应的密码子，mRNA与DNA之间的碱基互补配对原则 4.若用相关核酸片段合成目的基因，④是反转录或诱导突变 5.蛋白质工程中，要对蛋白质结构进行设计改造，必须通过基因修饰或基因合成来完成，而不直接改造蛋白质的原因是：改造基因易于操作且改造后能够遗传 酶解法(纤维素酶和果胶酶);诱导融合因子(离心震荡电刺激;PEG) 植物体细胞杂交 培养基成分(4):无机盐、植物激素、蔗糖、琼脂 培养条件(3):PH 、T 、光照 操作要求(3):培养基灭菌、外植体消毒、超净台无菌操作 植物组织培养 相关考试信息 技术 （1）图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是动物细胞培养（2）图甲中②过程常在灭活的病毒诱导下完成，④过程与体外培养相比，其优点是不需要特定的培养基，不需要严格的外界环境条件。 （3）在制备单克隆抗体时，涉及三次筛选过程：选出能产生抗体的浆细胞；在特定培养基中筛选出杂交瘤细胞；选出能产生特定抗体的并能大量增殖的细胞群 （4）在骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合容器中共有几种细胞？5共有几种融合细胞？3 （5）杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体 （6）单克隆抗体能定向攻击癌细胞，主要是利用其特异性强的特点。用做诊断试剂又体现了其灵敏度高的特点。 （7）克隆羊的性别由哪只羊决定