转录(transcription)是指以DNA为模板.pptVIP

第五章 转 录 张西玉 一、原核生物的RNA聚合酶(RNA polymerase) 大部分原核生物的RNA聚合酶的结构十分相似，但蓝藻菌和古细菌的RNA聚合酶比较特别。在真细菌中，只有一种RNA聚合酶，负责mRNA(messenger RNA),tRNA(transfer RNA)和rRNA(ribosomal RNA)的转录。细菌的RNA聚合酶的大小约为9.5nm×9.5nm×16nm。在聚合酶的表面，形成一条约2.5nm宽的通道，或称为沟，可能是容纳DNA分子的场所。大肠杆菌的RNA聚合酶是目前了解最详细的RNA聚合酶，每个细胞中约有7000个RNA聚合酶分子，合成RNA的速度约为40个核苷酸/秒。 1、大肠杆菌RNA聚合酶(E.coli RNA polymerase) 大肠杆菌RNA聚合酶由多亚基组成。α2ββ′σ称为全酶（holoenzyme），分子量约为480kDa。σ亚基与全酶结合疏松，应用磷酸纤维素柱很容易使之与全酶分离。解离后的部分称为核心酶（core enzyme）（α2ββ′）。全酶可以起始RNA的合成，之后σ亚基从全酶解离下来。全酶的组装过程可能如下：α2+β+β′+σ。 2、σ因子 σ因子在RNA聚合酶识别启动子的过程中起关键作用，大肠杆菌至少有4种σ因子，σ70负责识别一般的启动子，σ32识别热激（heat shock）蛋白质基因启动子，σ38负责识别碳源饥饿条件下的基因启动子，σ54识别与氮代谢有关的基因启动子。 表5–1 大肠杆菌的σ因子及其特性 基因 分子量 用途 -35区 识别序列间隔 -10区 rpoH 32kDa 热激 CCCTTGAA 13~15bp CCCGATNT rpoD 70kDa 普通 TTGATC 16~18bp TATAAT rpoE 38kDa 碳缺乏 不详 不详 不详 rpoN 54kDa 氮缺乏 CTGGNA 6bp TTGCA 3、σ因子的更替对转录起始的调控 在大肠杆菌中，RNA聚合酶转录了所有的基因，基σ因子可识别多种启动子。对特异启动子的识别需要特异辅助因子的参与。在细菌受到外界环境的急剧影响或芽孢菌生活方式改变时，会产生σ因子更替的现象。 表5-2 真核生物的RNA聚合酶 酶 定位 转录产物 相对活性 对鹅膏蕈碱的敏感性 RNApol I 核仁 rRNA 20-40% 不敏感 RNApol II 核质 核RNA 10% 敏感 RNApol III 核质 tRNA 50-70% 不同种类敏感性不同 一、原核生物的启动子 1、原核生物启动子的结构 在原核生物的启动子中，有4个区域：转录起始点、－10区、－35区、－10与－35之间的序列。 （1）转录起始点 转录起始点在多数情况下（90%）下为嘌呤，G比A更常见。常见的序列为CAT或CGT，A为转录起始点。由于CAT的保守程度还不够高，因而不能做为固定的转录起始点序列。 2、启动子功能的研究方法 研究启动子功能的主要方法是启动子的突变。使启动子的碱基序列发生变化，可以改变启动子的强弱，也就是说增强或减弱该启动子所控制的结构基因的转录。大多数突变是使启动子的功能减弱或消失，这种突变称为下降突变(down mutation)；少数突变能使启动子的功能增强，称为上升突变(up mutation)。 3、RNA聚合酶与启动子的结合 大多数与RNA聚合酶紧密结合的位点集中在启动子的－35区至－10区之间。在这一区域，碱基的修饰可以阻止与RNA聚合酶的结合。 二、真核生物的启动子 真核生物细胞中有三种转录方式，分别由三种RNA聚合酶（I、II和III）催化，因此有三种启动子。根据启动子的不同，将真核生物的基因分为三类，即I类、II类和III类基因。这三种基因分别由三种启动子控制，它们在结构上各有特点。 1、RNA聚合酶I的启动子的结构 和其他两类启动子相比，RNA聚合酶I的启动子间的差异最小。因为RNA聚合酶I只转录rRNA一种基因，包括5.8S、18S和28S rRNA。三种rRNA的基因（rDNA）成簇存在，共同转录在一个转录产物上，然后经加工成为三种rRNA。 2、RN