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DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II DIG High Prime DNA 标记及杂交检测试剂盒II 说明书版本：Version12 （2009 年11 月） 利用随机引物法及DIG-dUTP （碱不稳定）进行DNA 标记反应，采用酶联免疫方法及即用型 化学发光底物CSPD 进行杂交分子的显色。 2 本试剂盒可对 10ng-3μg DNA 进行 12 次标记反应，可进行24 次杂交检测反应（100cm 杂 交膜）。 产品目录号：11 585 614 910 试剂盒于-15 ~ -25℃保存 1 1. 概况 1.1 说明书内容 1. 概况……………………………………………………………………………………… 2 1.1 说明书内容…………………………………………………………………………………2 1.2 试剂盒组成…………………………………………………………………………………3 2. 介绍……………………………………………………………………………………… 4 2.1 产品概述…………………………………………………………………………………4 3. 实验步骤和需要的材料…………………………………………………………………7 3.1 实验开始前准备…………………………………………………………………………7 3.2 实验流程…………………………………………………………………………………7 3.3 DIG-DNA 标记……………………………………………………………………………7 3.4 定量标记反应效率………………………………………………………………………10 3.5 DNA 转膜和固定…………………………………………………………………………12 3.6 杂交……………………………………………………………………………………… 13 3.7 免疫检测…………………………………………………………………………………14 3.8 探针洗脱和重探…………………………………………………………………………15 4 附录……………………………………………………………………………………… 17 4.1 疑难问题解决……………………………………………………………………………17 4.2 参考文献…………………………………………………………………………………18 2 1.2 试剂盒组成 管/瓶号 标签 成分及功能 1 DIG-High Prime •50μl，用于DNA 的随机引物法高效标记，即用 •5×标记反应液，含浓度优化的随机引物、核苷酸、 DIG-dUTP （碱不稳定）、Klenow 酶及缓冲液。 •澄清的粘性溶液 2 DIG-labeled Control DNA •20μl，用于确定反应标记效率 •pBR328DNA (5μg/ml ,BamHI 线性化处理) •澄清溶液 3 DNA Dilution Buffer •3×1ml •10mM Tris-HCl, 1mM EDTA（含50μg/ml 鱼精DNA， pH8.0, 25℃) •澄清溶液 4 Anti-Digoxigenin-AP •50μl Conjugate •750U/ml，Fab 片段，羊源，结合了碱性磷酸酶