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STochastic Optical Reconstruction Microscopy
1、STORM的基本原理
1.1、STORM的成像基础
1.2、单分子定位
σμk
散粒噪声
1.02
+像素大小
1.04
+背景噪声
1.24
散粒噪声是最重要的影响因素！
1.3、光控开关荧光分子
首先采用一束较强的红光使观测范围内所有的Cy5进入暗态,接着采用较弱的绿光抽运Cy3到激发态,通过处于激发态的Cy3与Cy5的相互作用使一小部分Cy5从暗态恢复至荧光态。此时,再次利用红光可以激发这一小部分Cy5发射荧光。发射荧光后的Cy5将再次暂时进入一个稳定的暗态,等待下次被激活。通过红绿激光对Cy3-Cy5荧光分子进行交替照明,可使Cy5荧光分子反复经历“激发-荧光发射-暂时漂白-恢复-再激发”的循环达数百次,直到最终被永久性漂白。
Cy3 （activator）
Cy5（reporter）
1.3、STORM成像技术
多色成像和 3D STORM技术
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