《病原生物与免疫学实验》实验四MTT比色法检测小鼠脾脏NK细胞活性.pptVIP

《病原生物与免疫学实验》实验四MTT比色法检测小鼠脾脏NK细胞活性.ppt

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Page ? * 本作品采用知识共享署名-非商业性使用 2.5 中国大陆许可协议进行许可。 专业交流 模板超市 设计服务 本作品的提供是以适用知识共享组织的公共许可( 简称“CCPL” 或 “许可”) 条款为前提的。本作品受著作权法以及其他相关法律的保护。对本作品的使用不得超越本许可授权的范围。 如您行使本许可授予的使用本作品的权利,就表明您接受并同意遵守本许可的条款。在您接受这些条款和规定的前提下,许可人授予您本许可所包括的权利。 查看全部… NordriDesign?中国专业PowerPoint媒体设计与开发 由NordriDesign?提供 Page ? * 实验四 MTT比色法检测小鼠脾脏NK细胞活性 (MTT比色法检测小鼠脾脏NK细胞活性) 原理: 1. 制备小鼠脾细胞(含NK细胞) 2. NK细胞与肿瘤细胞( YAC-1 )共孵育,NK活性越强,肿瘤细胞被杀死越多。 3. MTT底物可被活细胞线粒体的琥珀酸脱氢酶还原成蓝紫色产物,死细胞无此功能;活细胞越多,颜色越深;据此推断活细胞或死细胞多少。 4. 经酶标仪比色后,可计算出NK细胞活性。 主要方法: (一)免疫细胞(小鼠脾NK细胞)的制备 (二)NK细胞活性测定(MTT比色法) MTT比色法检测小鼠脾脏NK细胞活性 [方法]: 1、靶细胞制备 YAC-1细胞,洗涤,计数,调整至2×105/ml (已制备好,用前摇匀) 2、效应细胞(脾NK细胞)制备 处死小鼠,消毒取脾,制成脾细胞悬液,过滤,离心洗涤,计数,调整细胞浓度至2×106/ml。(具体操作如下) 2、效应细胞(脾NK细胞)制备 (1)脱颈椎处死小鼠,放入中号平皿; (2)酒精棉球消毒,无菌取出脾脏,放入小平皿; (3)脾脏用Hanks液冲洗一次; (4)轻轻拉碎脾脏,并悬浮于约3ml Hanks液中;稍倾斜静置5分钟,使大块组织沉降; (5)吸上清过120目或200目滤网,滤液滤入试管; (6)滤液1500转/min离心5min,倒去上清; (7)脾细胞沉淀用Hanks液洗2次(加入3ml Hanks液,混匀,1500r/min,离心5min,倒去上清;重复上述步骤1次); (8)用1ml 1640培养液溶解脾细胞沉淀,混匀,配成脾细胞悬液(原液),计数(吸取10ul加入390ul白细胞稀释液中,稀释40倍,用血球计数板在显微镜下计数),根据P53页公式计算脾细胞悬液原液中脾细胞浓度; (9)吸取一定量脾细胞悬液原液,用1640培养液配制2×106/ml浓度的脾细胞悬液1毫升至2毫升,待用。 3、细胞毒试验 按表7-3加样, 4、孵育 二氧化碳培养箱孵育2小时; 加MTT,继续孵育2小时。 5、测OD值 轻轻吸弃上清,加二甲亚砜150ul ,振荡10min,测OD值。 6、结果分析 表7-3 MTT法测NK细胞活性试验各组成分(3复孔/组) 实验组 靶细胞对照组 效应细胞对照组 空白对照 靶细胞 100ul 100ul —— —— 效应细胞 100ul —— 100ul —— 1640培养基 —— 100ul 100ul 200ul (1- 实验组OD值 - 效应细胞对照组OD值 靶细胞对照组OD值 )×100% NK细胞活性(%)= (1- 实验组OD值 - 效应细胞对照组OD值 靶细胞对照组OD值 )×100% NK细胞活性(%)= 附:P53细胞计数公式: 细胞浓度(细胞数/ml原液)= 4大格内的细胞总数 4 ×10000×稀释倍数 D B C A * 切记不可用“白细胞稀释液稀释过的脾细胞悬液”配步骤(9)中的“2×106/ml浓度的脾细胞悬液” * 10*10 * Page ? * 本作品采用知识共享署名-非商业性使用 2.5 中国大陆许可协议进行许可。 专业交流 模板超市 设计服务 本作品的提供是以适用知识共享组织的公共许可( 简称“CCPL” 或 “许可”) 条款为前提的。本作品受著作权法以及其他相关法律的保护。对本作品的使用不得超越本许可授权的范围。 如您行使本许可授予的使用本作品的权利,就表明您接受并同意遵守本许可的条款。在您接受这些条款和规定的前提下,许可人授予您本许可所包括的权利。 查看全部… NordriDesign?中国专业PowerPoint媒体设计与开发 由NordriDesign?提供 Page ? * * 切记不可用“白细胞稀释液稀释过的脾细胞悬液”配步骤(9)中的“2×106/ml浓度的脾细胞悬液” * 10*10 *

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