《超分辨荧光显微镜技术》细胞成像技术小组展示.pptxVIP

超分辨荧光显微镜技术;衍射极限;SIM是常规荧光显微镜在匀场照明的基础上，通过改变照明光的空间结构，使记录的图像包含更多高频信息，利用特定的算法将这些信息分离出来，重构出超分辨图像。;结构光照明特点;STED基本原理：STED的关键是减小了单个扫描点出的有效荧光发光面积，突破了衍射极限的限制。利用了当荧光分子被损耗激光照射时，可以强行猝灭回到基态的特性。;;要在 STED 显微术中实现较高的空间分辨率，需要在样品上施加光强较强的损耗光。然而，较强的损耗光强不仅会增大功耗，同时也会对荧光样品造成光漂白和光毒害。。;荧光分子首先被特定激光照射到暗状态；然后打开激活激光，激发出稀疏单分子；记录好单分子后，利用漂白激光将其漂白接着打幵激活激光重新激发出新的单分子。如此反复，得到大量的稀疏存在图像，然利用高斯函数去拟合这些中心，这样就获得了突破衍射极限的超分辨图像。;1.极高的分辨率，横向分辨率可以到达10 nm !2.可以进行单分子轨迹追踪和单分子定量计算中。3.对荧光蛋白有要求。;;11;近场光学显微镜，用孔径远小于光波长的探针代替光学镜头。当把这样的亚波长探针放置近场区域时，通过探测束缚在物体表面的非辐射场，可以探测到丰富的亚微米光学信息。;近场扫描光学显微镜物理原理;