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生物化学实验复习题： 试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋光度是不同的。其在171～195之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。 淀粉含量测定的方法有几种？比较各方法特点。淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋光法等。1、酸水解法：面粉经乙醚除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖，按还原糖测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。2、酶水解法：面粉经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。3、旋光法：在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同面粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在171~195之间，因此可用旋光法测定淀粉的含量。 简述旋光法测定淀粉的关键步骤。1.样品的处理 在电子天平上称取小麦粉2.5000g置于三角瓶中→加入50ml 1%HCl混成浆状（不能有结块）→沸水浴中准确加热15min→先加1ml 30% ZnSO4混匀→再加1ml 15%亚铁氰化钾混匀→移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去最初15ml收集其余滤液。 2.旋光度测定 取滤液20ml置于旋光管中，先用1%HCl 调节旋光仪“0”点，然后将样品溶液放入旋光仪中测α 写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。 试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。 蛋白质含量测定的方法有几种？比较各方法特点。 ①染料法，该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的，故该法适合测定与标准蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。 双缩脲(Biuret)法，此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法双缩脲法操作简单，线性关系好，但灵敏度差，样品需要量大，测量范围窄，因此在科研上的应用受到限制；而酚试剂法弥补了它的缺点，因而在科研中被广泛采用，但是它的干扰因素多；②定氮法,双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮蓝法（Bradford法）.凯氏定氮 灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2％ 费时?10小时 将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离） 用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长双缩脲法（Biuret法） 灵敏度低 20mg 中速 20~30分钟 多肽键＋碱性Cu2＋?紫色络合物 硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸 用于快速测定,但不太灵敏；不同蛋白质显色相似紫外吸收法 较为灵敏 50～100mg 快速 10分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶；Folin－酚试剂法（Lowry法） 灵敏度高 5mg 慢速 40～60分钟 双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原 硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇 耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化?考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高 5mg 快速5～15分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；SDS 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定； 颜色深浅随不同蛋白质变化 简述凯式定氮法测定蛋白质的关键步骤。1、消化：在电子天平上称取小麦粉0.2000g--0.4000g 置于凯氏试管底部→加混合混合催化剂0.5g和3ml浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（2h左右）取出放入通风橱内至不冒白烟，向其中加20ml水，并移至100ml容量瓶定容→即得样品消化液。 同时每4组8人做1空白实验：0.5g混合催化剂+3ml浓硫酸置于凯氏试管中放入消化炉加热至淡绿色（1h左右）→冷却后加水移入100ml容量瓶中定容得空白消化液。 2.蒸馏与吸收：吸取10