krüppellike factor 5在放射性肠损伤及其修复过程中作用的初步研究-preliminary study on the role of kr ü pper like factor 5 in the process of radiation intestinal injury and its repair.docxVIP

KLF5 在放射性肠损伤及其修复过程中作用的初步研究英文摘要KLF5 could promote repair process induced by X-ray in intestine.KEYWORDS: Ionizing radiation; Intestinal injury; KLF5; Cre-loxPWrittenby Gu YuanSupervised by Wang ChangIII目录引言 1 第一部分 电离辐射对小肠组织及 KLF5 表达的影响 5 前言 5材料 5实验方法 71电离辐射所致肠损伤小鼠模型的建立 72X 射线作用下 KLF5 及其相关蛋白的表达 83统计学处理 10结果 101电离辐射所致小鼠肠损伤模型 102KLF5 及其相关蛋白的表达变化12讨论 13小结 15第二部分 KLF5 遗传改造小鼠的建立及其对小肠形态和功能的影响18前言 18材料 19实验方法 201遗传改造小鼠的获取 202遗传改造小鼠基因型鉴定 203遗传改造小鼠表型鉴定 224遗传改造小鼠形态功能的检测 225统计学处理 23结果 231遗传改造小鼠基因型鉴定 232遗传改造小鼠表型鉴定 243KLF5 对小肠形态和功能的影响25讨论 29小结 31 第三部分KLF5 在放射性肠损伤中的作用 33 前言 33材料 34实验方法 351小鼠分组与处理 352KLF5 对照后小鼠小肠的影响 353统计学处理 36结果 361形态学变化 362细胞增殖 393细胞凋亡 424细胞分化 44讨论 46小结 49综述：KLF5 在细胞增值分化过程中的分子机制及其在人类疾病中的研究进展 .. 53攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文70致谢 71引言KLF5 是 Krüppel 样因子（Krüppel-like factors，KLFs）家族成员之一，又名 BTEB2、IKLF（Intestine-enriched Krüppel-like Factor），是进化保守的锌指蛋白转 录因子，受其调控的基因可参与细胞增殖、分化、迁移、周期、凋亡和组织发育 等各种生物学过程[1]。KLF5 的表达和活性受到多条信号通路包括 Ras/MAPK、蛋 白激酶 C、PI3K 和转化生长因子 β（TGFβ）以及各种翻译后修饰如磷酸化、乙酰 化、泛素化和小泛素化的调控[1]。KLF5 主要表达在肠隐窝底部增殖的细胞中，遗 传改造小鼠的研究说明其在体内的功能十分重要。传统的 KLF5 纯合敲除小鼠在胚 胎的 8.5d 即死亡[2]；KLF5 杂合敲除小鼠存在先天肠道缺陷如绒毛畸形和肠纤维化， 并且对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎敏感[3]；肠上皮特异性敲除 KLF5 的成 年小鼠在形态学上表现出一系列形态改变，包括肠道细胞增生、屏障功能受损、 炎症细胞浸润以及上皮分化和迁移缺陷等[4]。上述研究表明，KLF5 在肠道组织稳 态维护中起十分重要的作用。KLF5 在多种肿瘤均有异常表达，因此目前多数研究集中在 KLF5 异常表达在 肿瘤发生发展中的作用[1]。KLF5 对心血管疾病的影响也得到广泛关注[1]。但其在 放射性肠损伤中的作用尚未见相关文献报道。现已知多种组织损伤因素均可诱导 KLF5 表达，如 DNA 损伤因素 5-氟尿嘧啶（5-FU）和紫外线可诱导结肠癌细胞株 HCT116 表达 KLF5，抑制 KLF5 表达可使上述 DNA 损伤因素诱导的细胞凋亡增加 [5]。此外，细菌成分脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）可通过 MAPK 通路诱导大 鼠空肠上皮细胞株 IEC-6 表达 KLF5，KLF5 的表达可进一步激活 NF-κB 信号通路， 引发炎症反应[6]。体内研究表明，DSS 处理[3]和柠檬酸细菌感染[7]的小鼠结肠 KLF5 表达明显增加。因此，KLF5 被认为是体外应激响应基因。KLF5 应激性的增加具有怎样的功能呢？研究表明，KLF5 的应激表达可能参 与组织的损伤修复。如给予 Klf5 过表达转基因小鼠 DSS 处理，其结肠的损伤程度 明显轻于对照小鼠，同时该小鼠的恢复程度也优于对照小鼠[8]。相关机制研究提示， KLF5 参与损伤修复可能通过以下途径：首先，KLF5 具有促进细胞增殖的功能， 它可促进多种类型的细胞增殖。在肠上皮细胞中，KLF5 的表达与 Ki67（增殖标志物）的表达位置吻合[7]。体内研究表明，KLF5 介导柠檬酸细菌感染引起的结肠上 皮细胞过度增殖[7]和 DSS 结肠炎小鼠的组织再生[3]。体外实验显示，全反式维甲酸（ATRA）通过抑制 KLF5 表达抑制 IEC-6 细胞的增殖[9]；溶血磷脂酸（LPA）通 过诱导 KLF5 促进肠上皮细胞和结肠癌细胞