参附汤超微粉单次及多次给药在大鼠体内组织分布研究.docVIP

参附汤超微粉单次及多次给药在大鼠体内组织分布研究 　　【摘要】 目的 观察不同粒径的参附汤超微粉单次及多次给药在大鼠体内的组织分布,评价其安全性,为临床研究提供依据。方法 采用高效液相色谱法测定参附汤传统饮片与超微粉单次及多次给药后组织中乌头碱的含量。结果 参附汤超微粉中乌头碱在大鼠体内有蓄积的现象。结论 参附汤超微粉与参附汤传统饮片均有体内蓄积的可能,不可久服。 　　【关键词】 参附汤超微粉; 组织分布;大鼠 　　 　　基金项目:本研究系湖南省科委重点资助项目(项目编号:04sk1007-10) 　　作者单位:410005湖南省中医院 　　 　　1 实验材料 　　1.1 药品和试剂 一等人参、附子药材均从湖南省药材公司购置,由湖南省中药超微工程技术研究中心鉴定符合《中国药典》2005版“人参、附子”项下规定。并分别加工为传统饮片、3种不同粒径超微粉(超微粉1粒径D?90?为18.75 μm、超微粉2 D?90?为37.5 μm、超微粉3 D?90?为75 μm)。取参附汤传统饮片饮片,用水煎煮2次,过滤,滤液浓缩至相当生药量为2.14 g/ml;取参附汤超微中药各粒径粉用水煎煮2次,过滤,滤液浓缩至1.07 g/ml,另取超微粉3滤液,浓缩至2.14 g/ml。参附汤传统饮片推荐成人日用量为15 g,参附汤超微粉推荐成人日用量为7.5 g。 　　1.2 仪器 岛津LC-10A高效液相色谱仪(配有SCL-10Avp输液泵,SIL-10ADvp紫外检测器,CTO-10Asvp柱温箱),日本岛津色谱工作站;TGL-16高速台式离心机;HZS-H水浴振荡器。 　　1.3 动物 SD大鼠,SPF级,由上海西普尔-必凯实验动物有 　　 　　限公司提供,实验动物生产许可证号为SCXK(沪)2003-0002,实验动物合格证号为0029453。 　　2 方法 　　2.1 单次给药后的组织分布 48只SD大鼠,随机分为参附汤超微粉3组、参附汤传统饮片组(每组下设A、B、C、D4个亚组,每亚组6只),雌雄各半,分别以10.7 g/kg、21.4 g/kg灌胃。给药前大鼠禁食过夜直至实验结束,不禁水。各亚组大鼠分别在给药后1,3,5,7 h 股动脉放血处死,取心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器, -20℃冷冻保存,分析时,解冻后滤纸吸干水分,称重,按重量体积比(1∶5)加入HCl1.0 mmol/L,匀浆,3000 r/min离心10 min,取上清液置三角瓶中,用饱和NaHCO3溶液调各个脏器的匀浆上清液pH值至8~9,置于冷冻干燥瓶中,进行冷干处??至完全干透。用乙酸乙酯分别提取肝脏(30 ml×3)、肾脏(25 ml×3)、脾脏(15 ml×3)、心脏(20 ml×3)、肺(20 ml×3)、脑(20 ml×3),合并各组提取液,40℃减压蒸干,将各个脏器样品残渣用甲醇溶解,肝脏800 μl,肾脏600 μl、脾脏850 μl、心脏900 μl、肺700 μl、脑500 μl、3000 r/min离心5 min,取上清液30 μl供HPLC分析[14]。 　　2.2 多次给药后的组织分布 　　48只SD大鼠,随机分为参附汤超微粉3组、参附汤传统饮片组(每组下设A、B、C、D四个亚组,每亚组6只),雌雄各半,分别以10.7 g/kg、21.4 g/kg剂量灌胃。连续给药90 d ,末次给药前大鼠禁食过夜直至试验结束,不禁水。各亚组大鼠分别在给药后1,3,5,7 h股动脉放血处死,取心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器,所取组织及组织样品的处理、分析同“2.1”项。 　　2.3 色谱条件 色谱柱 MN-Nucleosil7C6H5不诱钢柱(250 mm×4.0 mm);流动相:甲醇:水:氯仿:三乙胺(70:30:1:0.2);流速:1.5 ml/min;检测波长:235nm;检测温度:室温。进样量20 μl。进样前考察研究方法的可靠性和稳定性,建立色谱图、标准曲线,考察其回收率和精密度。 　　2.4 数据分析 采用中国药理学会的3P97实用药代动力学计算程序计算处理, 获得各项组织分布参数;结果为计量资料,以x±s表示,采用SPSS11.0软件包分析处理;方差齐时,采用方差分析(最小显著差法,LSD),不齐,则采用近似方差分析(Tamhane′s T2)。 　　3 结果 　　3.1 大鼠单次与多次给药后的组织分布 单次和多次(90 d) 给药后,不同时间点乌头碱在各组织中的分布结果见表1、表2。结果表明乌头碱在肝脏的浓度最高,其次是肾脏和心脏;重复给药90 d 后,各组织中的乌头碱浓度均有增高。 　　 　　表1 　　 　　大鼠单次给参附汤后的组织分布(x±s,n =6,μg/g) 　　 　　组织时间点?(