表面增强拉曼光谱结合胶体金免疫层析技术(sers-ica)的分析和应用-analysis and application of surface enhanced raman spectroscopy combined with colloidal gold immunochromatography ( sers - ica ).docxVIP

表面增强拉曼光谱结合胶体金免疫层析技术（SERS-ICA）的研究和应用中文摘要中文摘要借助于粗糙贵金属表面数百万倍的信号增强效应，表面增强拉曼光谱（Surface-EnhancedRamanSpectroscopy，SERS）技术可检测低至单分子水平的目标物，已经成为目前最灵敏的分析方法之一。表面增强拉曼光谱免疫分析（SERSImmunoassay，SERSIA）技术是一种结合了表面增强拉曼光谱的高灵敏度和免疫分析（Immunoassay，IA）的高特异性的超灵敏分析技术，并在近些年受到了持续的关注。然而目前该方法却也存在如下几个方面的问题：①操作复杂：材料的制备和预处理、孵育、洗涤、封闭等步骤不仅耗时而且繁琐；②重现性低：虽然SERSIA灵敏度高，但现有大部分方法都难以采集到均匀的拉曼信号；③模式单一：SERSIA的分析对象多以大分子物质如蛋白质或者细胞为主，亟需拓展到其他领域比如检测小分子物质；④成本高：目前SERSIA活性基底多为贵金属材料，拉曼仪器和设备不仅采购、维护成本高昂，而且上机操作复杂，这些问题都在一定程度上限制了SERSIA技术的应用。针对上述问题，本论文首先以拉曼信号的均匀度为依据，初步考察了几种SERSIA基底材料；其次以硝酸纤维素膜（Nitrocellulosemembrane,NC）为SERSIA基底，并基于胶体金免疫层析法（ImmunochromatographicAssay，ICA）提出了一种使用便携式表面增强拉曼光谱仪的简便、快速、低成本而又超灵敏的表面增强拉曼光谱免疫层析技术（SERS-ICA）；最后运用该方法检测了两种不同分子量的目标物，通过一些条件的优化，均得到优异的检测结果。论文的主要工作有以下三个方面：①成功制备了拉曼标记免疫胶体金，并结合便携式表面增强拉曼光谱仪和课题组制备的盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CL）多克隆抗体和包被抗原，初步考察了SERSIA中的几种基底材料，并发现：磁珠@Au工艺复杂，检测难度大且重现性低；贵金属基底虽然性能较好，但是价格昂贵；功能化玻片虽然成本低，但探针分布过于分散、过程繁琐且耗时；而基于新型SERS-ICA法的NC膜不仅成本低、易操作、简便、快捷，而且拉曼标记免疫探针高度集中在约150μm宽的检测线（T线），可采集到更为均匀的信号。②通过在胶体金表面分别标记拉曼标记分子和抗体，将SERS和ICA有机结合，建立了新型的SERS-ICA法用于检测盐酸克伦特罗，并优化了一些实验条件，获得优中文摘要表面增强拉曼光谱结合胶体金免疫层析技术（SERS-ICA）的研究和应用异的检出效果，灵敏度为0.01ngmL-1，检出限为0.06pgmL-1，还评价了方法的重现性和特异性等。③基于夹心SERS-ICA技术成功的检测了癌胚抗原(CarcinoembryonicAntigen，CEA)，线性范围在3-150ngmL-1之间，检出限也比使用同一批次抗体的ICA法降低了50倍，并具有良好的特异性，实验结果表明SERS-ICA技术可推广到大分子物质的检测领域。关键词：表面增强拉曼光谱免疫分析；胶体金免疫层析法；盐酸克伦特罗；癌胚抗原作者：常化仿指导教师：邓安平教授StudiesandApplicationsofSERSBasedImmunochromatographicAssay(SERS-ICA)AbstractStudiesandApplicationsofSurface-enhancedRamanSpectroscopyBasedImmunochromatographicAssay(SERS-ICA)AbstractBecausethemilliontimesofscatteringsignalenhancementbyroughnoblemetalsurface,Surface-enhancedRamanspectroscopy(SERS)canprovideanondestructiveandultrasensitivedetectiondowntothepossibilityofsinglemoleculelevelandhasbeenoneofthemostsensitiveanalyticalmethodssofar.SERSbasedImmunoassay(SERSIA)hasattractedincreasingattentionsbecauseofitshighsensitivityarosefromSERSandhighselectivitybasedonthespecificreactionbetweenantibodyandantigen.However,theapplicationofSERSIAislargelylimitedbyt