雌激素对pes1的调节作用及相关机制分析-regulatory effect of estrogen on pes 1 and analysis of related mechanisms.docxVIP

发现：每当ER-ɑ水平敲低时，PES1也随即下调，而且在三种细胞中均有体现。相反，我们将乳腺癌细胞BICR的PES1敲低，发现ER-ɑ的水平也有所下调。正反两方面证明ER-ɑ与PES1有一定相关性。第二方面，为了验证ER对PES1的稳定性有无影响，敲低细胞BICR和ZR75中ER-ɑ，构建ER-ɑ相对表达较低的环境，分别在两个组（干扰ER和未干扰ER）中加入放线菌酮（Cycloheximide，缩写CHX），采用WesternBlotting技术，以GAPDH为内参，比较上述细胞中PES1的表达情况。实验表明，在同一浓度CHX的作用下，两个组PES1随着时间的推移，均在逐步降解，但是干扰ER的实验组PES1降解会更快。尤其以乳腺癌细胞ZR75最为突出。第三方面，用免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）技术来检测细胞BICR中ER-ɑ与PES1之间的相互作用。结果提示：ER的抗体可以不同程度地使蛋白PES1沉淀，说明在乳腺癌细胞BICR中内源性ER和PES1可以相互作用。第四部分，我们对乳腺癌细胞中PES1的生物学功能进行初步研究。敲低乳腺癌细胞中的PES1后，做平板克隆形成实验和细胞周期的检测（流式细胞仪）。初步结果显示，PES1可以降低细胞的平板克隆形成能力。同时，PES1对细胞周期有一定影响，但作用不是很明显。因此，PES1的生物学功能需要进一步探讨。综上所